| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 转胶蛋白综述 | 第13-20页 |
| 1 CH 结构 | 第13-14页 |
| ·CH 结构域 | 第13页 |
| ·CH 结构域的来源及含CH 结构域蛋白的分类 | 第13-14页 |
| 2 转胶蛋白 | 第14-20页 |
| ·转胶蛋白的进化分析 | 第14-15页 |
| ·转胶蛋白的结构 | 第15-16页 |
| ·转胶蛋白的生物学功能 | 第16-19页 |
| ·转胶蛋白与平滑肌细胞(smooth muscle cells, SMC) | 第17页 |
| ·转胶蛋白与细胞骨架 | 第17-18页 |
| ·转胶蛋白与肿瘤 | 第18-19页 |
| ·转胶蛋白的研究现状及展望 | 第19-20页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第20-22页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第20页 |
| 2 实验内容 | 第20页 |
| 3 实验流程图 | 第20-22页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第22-30页 |
| 1 生物信息学分析工具 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22页 |
| 3 结果 | 第22-28页 |
| ·BmTGN 基因的序列 | 第22-23页 |
| ·疏水性分析 | 第23-24页 |
| ·Bm TGN 的跨膜区分析 | 第24页 |
| ·信号肽预测 | 第24-25页 |
| ·磷酸化位点预测 | 第25-26页 |
| ·BmTGN 的二级结构预测 | 第26页 |
| ·BmTGN 的高级结构预测 | 第26-27页 |
| ·BmTGN 定位的预测 | 第27页 |
| ·同源性分析 | 第27-28页 |
| 4 讨论 | 第28-30页 |
| 第四章 家蚕转胶蛋白基因的原核表达 | 第30-44页 |
| 1 材料与试剂 | 第30-33页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·主要试剂的配制 | 第30-33页 |
| ·大肠杆菌培养抽提质粒用溶液 | 第30-31页 |
| ·核酸电泳所用溶液 | 第31页 |
| ·镍柱亲和层析纯化用试剂 | 第31页 |
| ·反相FPLC 纯化用试剂 | 第31-32页 |
| ·SDS-PAGE 用试剂 | 第32-33页 |
| 2 方法 | 第33-39页 |
| ·BmTGN 基因的克隆 | 第33-37页 |
| ·总RNA 的提取 | 第33页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第33页 |
| ·PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·切胶回收PCR 产物 | 第34-35页 |
| ·质粒提取 | 第35页 |
| ·PCR 产物与表达载体pET-28a(+)的双酶切 | 第35页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第35页 |
| ·连接反应 | 第35-36页 |
| ·E.coli TG1、Rosetta 感受态细胞的制备(CaC12 法) | 第36页 |
| ·连接产物的转化 | 第36页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第36-37页 |
| ·BmTGN 基因序列的测定 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第38页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第38页 |
| ·融合蛋白的亲和层析 | 第38页 |
| ·融合蛋白的FPLC 纯化 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白的质谱鉴定 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-42页 |
| ·PCR 扩增完整的ORF 序列 | 第39-40页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第40-41页 |
| ·PCR 鉴定 | 第40页 |
| ·双酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·BmTGN 基因序列的测定 | 第41页 |
| ·pET-28a(+)-BmTGN 的诱导表达及纯化 | 第41页 |
| ·融合蛋白的FPLC 纯化 | 第41页 |
| ·质谱鉴定 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第五章 多克隆抗体的制备和鉴定 | 第44-52页 |
| 1 材料与试剂 | 第44-46页 |
| ·材料与设备 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·主要试剂的配制 | 第44-46页 |
| ·Bradford 检测用试剂 | 第44页 |
| ·抗体制备用试剂 | 第44-45页 |
| ·ELISA 用试剂 | 第45页 |
| ·抗体纯化用试剂 | 第45-46页 |
| ·Western blotting 用试剂 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-49页 |
| ·Bradford 法定量 | 第46页 |
| ·抗原制备 | 第46页 |
| ·免疫动物 | 第46-47页 |
| ·多克隆抗血清制备 | 第47页 |
| ·抗体的效价测定（ELISA 间接法） | 第47-48页 |
| ·抗体的纯化 | 第48页 |
| ·Western blotting 检测抗体特异性 | 第48-49页 |
| 3 结果 | 第49-50页 |
| ·纯化蛋白定量 | 第49页 |
| ·抗体的效价测定 | 第49页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第49-50页 |
| ·Western blotting 检测 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 第六章 BmTGN 蛋白的表达分析 | 第52-62页 |
| 1 材料与试剂 | 第52-53页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·主要试剂的配制 | 第52-53页 |
| ·蛋白提取裂解液 | 第52-53页 |
| ·Bradford 检测用试剂 | 第53页 |
| ·SDS-PAGE 用溶液 | 第53页 |
| ·Western blotting 用试剂 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-56页 |
| ·总RNA 的提取 | 第53-54页 |
| ·逆转录成cDNA | 第54页 |
| ·荧光定量PCR | 第54-55页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第54-55页 |
| ·荧光定量PCR | 第55页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第55-56页 |
| ·总蛋白质的提取及定量 | 第56页 |
| ·Western blotting 检测BmTGN 蛋白的分布 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-60页 |
| ·家蚕发育过程中BmTGN mRNA 量的变化 | 第56-57页 |
| ·家蚕发育过程中BmTGN 蛋白表达量的变化 | 第57-58页 |
| ·五龄幼虫各组织中BmTGN m RNA 量的变化 | 第58-59页 |
| ·五龄幼虫各组织中Bm TGN 蛋白表达量的变化 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 第七章 亚细胞定位 | 第62-66页 |
| 1 材料与试剂 | 第62页 |
| ·材料 | 第62页 |
| ·试剂 | 第62页 |
| ·主要试剂的配制 | 第62页 |
| 2 方法 | 第62-63页 |
| 3 结果 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 总结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
