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褐飞虱翅型分化分子机理研究

序言第6-9页
摘要第9-11页
Abstract第11-12页
第一章 文献综述第21-53页
    1.1 昆虫翅型分化研究第21-29页
        1.1.1 翅型分化的差异第23-24页
        1.1.2 外界环境条件第24页
        1.1.3 种群密度第24-25页
        1.1.4 寄主营养第25页
        1.1.5 其它生物因素第25-26页
        1.1.6 遗传因素第26页
        1.1.7 内分泌机制第26-27页
        1.1.8 分子机制研究第27-29页
    1.2 胰岛素信号传导通路在昆虫中的研究第29-38页
        1.2.1 经典胰岛素信号通路第30-33页
        1.2.2 代谢第33-34页
        1.2.3 寿命第34页
        1.2.4 生长发育第34-35页
        1.2.5 激素调控第35-36页
        1.2.6 生殖第36页
        1.2.7 多型现象第36-37页
        1.2.8 行为第37-38页
    1.3 翅发育模式及基因网络研究第38-46页
        1.3.1 昆虫翅的基本发育模式和过程第38-39页
        1.3.2 翅发育过程中两个重要组织中心的建立第39-41页
        1.3.3 背板区和翅区的分化第41-42页
        1.3.4 翅叶区的发育第42-44页
        1.3.5 其它昆虫中翅发育基因网络研究第44-46页
    1.4 昆虫迁飞调控与褐飞虱迁飞研究第46-53页
        1.4.1 太阳罗盘定向机制第47-48页
        1.4.2 生物钟的时间补偿机制第48-50页
        1.4.3 地磁感应定向第50-51页
        1.4.4 褐飞虱迁飞机制的研究第51-53页
第二章 分子生物学常用仪器、试剂及方法第53-71页
    2.1 常用仪器第53-54页
    2.2 常用试剂配制第54-57页
    2.3 试虫饲养和常用实验方法第57-65页
        2.3.1 飞虱饲养第57-58页
        2.3.2 DNA琼脂糖凝胶回收第58页
        2.3.3 CaCl_2法感制备大肠杆菌感受态第58页
        2.3.4 T载体连接第58-59页
        2.3.5 热激法转化第59页
        2.3.6 质粒抽提第59-60页
        2.3.7 基因组DNA抽提第60页
        2.3.8 Trizol法抽提样品总RNA第60-61页
        2.3.9 总RNA反转录第61页
        2.3.10 荧光定量PCR第61-62页
        2.3.11 BCA蛋白浓度测定第62页
        2.3.12 免疫印迹分析第62-63页
        2.3.13 冰冻切片和全体免疫组化第63-65页
    2.4 飞虱RNA干扰显微注射技术第65-71页
        2.4.1 双链RNA(dsRNA)合成第65-66页
        2.4.2 琼脂糖胶台制作第66-67页
        2.4.3 注射后用于饲养飞虱的水稻罐制作第67-68页
        2.4.4 飞虱显微注射第68-70页
        2.4.5 注射后飞虱的饲养第70页
        2.4.6 RNAi验证第70-71页
第三章 褐飞虱基因组及翅型分化相关基因分析第71-113页
    3.1 引言第71-72页
    3.2 材料和方法第72-76页
        3.2.1 褐飞虱品系纯化及DNA抽提第72页
        3.2.2 全基因组鸟枪法测序和拼接第72-73页
        3.2.3 数据过滤和错误校正第73页
        3.2.4 基因组大小和杂合率评估第73页
        3.2.5 Fosmid文库构建、测序以及拼接第73-74页
        3.2.6 基因组拼接第74页
        3.2.7 测序深度分布第74页
        3.2.8 用序列表达标签(EST)评估基因区域的覆盖度第74页
        3.2.9 基因注释第74-75页
        3.2.10 预测基因和转录组序列比对以及RT-PCR验证第75页
        3.2.11 直系同源基因预测第75页
        3.2.12 系统发育树构建和分化时间预测第75-76页
        3.2.13 基因组DNA甲基化测序第76页
    3.3 结果与分析第76-109页
        3.3.1 褐飞虱基因组拼接及分析第76-82页
            3.3.1.1 褐飞虱基因组拼接第76-79页
            3.3.1.2 基因注释第79-81页
            3.3.1.3 同源基因和系统发生关系第81-82页
        3.3.2 基因组中翅型分化相关基因分析第82-106页
            3.3.2.1 营养信号通路相关基因分析第82-86页
            3.3.2.2 保幼激素合成相关基因分析第86-89页
            3.3.2.3 翅型发育基因网络分析第89-92页
            3.3.2.4 褐飞虱迁飞相关基因分析第92-101页
            3.3.2.5 生物钟相关基因分析第101-106页
        3.3.3 褐飞虱长短翅成虫基因组DNA甲基化差异分析第106-109页
    3.4 讨论第109-111页
    3.5 结论第111-113页
第四章 褐飞虱转录组分析及长短翅型表达谱比较第113-129页
    4.1 引言第113-114页
    4.2 材料和方法第114-116页
        4.2.1 样品材料第114页
        4.2.2 cDNA测序文库构建和illumina转录组测序第114页
        4.2.3 数字化表达谱文库制备和测序第114-115页
        4.2.4 数字化表达谱序列标签分析和比对第115页
        4.2.5 数字化表达谱文库评估和分析第115-116页
        4.2.6 荧光定量PCR第116页
    4.3 结果与分析第116-126页
        4.3.1 Illunima测序和拼接第116-117页
        4.3.2 序列注释第117-118页
        4.3.3 GO和KO注释第118-119页
        4.3.4 数字化表达谱测序评价及分析第119-121页
        4.3.5 短翅型雌虫和长翅型雌虫基因表达差异分析第121-125页
        4.3.6 基因组中预测的翅型分化相关基因的表达分析第125页
        4.3.7 基因表达分析和荧光定量PCR验证第125-126页
    4.4 讨论第126-128页
    4.5 结论第128-129页
第五章 胰岛素信号通路在稻飞虱翅型分化中的作用第129-173页
    5.1 引言第129-130页
    5.2 材料和方法第130-140页
        5.2.1 飞虱品系第130页
        5.2.2 飞虱长短翅表型确定第130页
        5.2.3 双链RNA合成第130页
        5.2.4 显微注射dsRNA第130页
        5.2.5 荧光定量PCR分析第130-135页
        5.2.6 褐飞虱前翅面积和后足胫节长度测量第135页
        5.2.7 褐飞虱全虫葡萄糖、海藻糖和糖原含量测定第135-137页
        5.2.8 褐飞虱翅芽中NlAkt磷酸化检测第137页
        5.2.9 免疫共沉淀分析第137-139页
        5.2.10 NlILP3和NlFOXO的免疫组化分析第139页
        5.2.11 酶联免疫吸附分析(ELISA)第139页
        5.2.12 图片采集和处理第139页
        5.2.13 统计方法第139-140页
    5.3 结果与分析第140-167页
        5.3.1 胰岛素受体对褐飞虱翅型分化的影响第140-143页
        5.3.2 胰岛素受体基因在褐飞虱不同组织中的定量分析第143-146页
        5.3.3 胰岛素信号通路各成员对翅型的影响第146-149页
        5.3.4 胰岛素受体对褐飞虱器官大小和糖类物质含量的影响第149-152页
        5.3.5 NlInR2和NlInR1下游的信号活性第152-154页
        5.3.6 胰岛素受体间的关系第154-155页
        5.3.7 NlFoxo对翅型的影响及其在不同组织中的定位第155-159页
        5.3.8 类胰岛素多肽对褐飞虱翅型的影响及组织定位第159-161页
        5.3.9 胰岛素受体对白背飞虱和灰飞虱翅型的影响第161-164页
        5.3.10 TOR信号通路对褐飞虱卵巢发育的影响第164-166页
        5.3.11 TOR信号通路影响了激素合成第166-167页
    5.4 讨论第167-170页
    5.5 总结第170-173页
第六章 褐飞虱长短翅型飞行肌组成差异研究第173-201页
    6.1 引言第173-174页
    6.2 材料和方法第174-178页
        6.2.1 肌肉蛋白提取和溶液内酶解第174-175页
        6.2.2 蛋白质谱第175页
        6.2.3 蛋白质谱数据分析第175-176页
        6.2.4 系统进化树和基因结构域分析第176页
        6.2.5 反转录PCR和荧光定量PCR分析第176页
        6.2.6 dsRNA合成第176-177页
        6.2.7 组织切片透射电镜第177页
        6.2.8 免疫印迹分析第177页
        6.2.9 免疫组化分析第177-178页
    6.3 结果与分析第178-197页
        6.3.1 长短翅型褐飞虱飞行肌肉组成差异第178-179页
        6.3.2 褐飞虱两种肌肉的蛋白质组分析第179页
        6.3.3 蛋白质组注释分析第179-184页
        6.3.4 间接飞行肌特异表达基因Flightin同源鉴定及系统发生分析第184-186页
        6.3.5 模体(motif)预测第186-188页
        6.3.6 Flightin基因的时空表达分析第188-193页
        6.3.7 Flightin基因干扰对间接飞行肌肌肉结构的影响第193-195页
        6.3.8 节肢动物中flightin基因的表达与定位第195-197页
    6.4 讨论第197-199页
    6.5 结论第199-201页
第七章 总结与讨论第201-205页
    7.1 全文总结与讨论第201-203页
    7.2 论文创新之处第203-205页
参考文献第205-227页
作者简历及在学期间所取得的科研成果第227-231页
致谢第231-234页

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