| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-30页 |
| 1.1 PHA的简介 | 第11-13页 |
| 1.2 细菌合成PHA | 第13-14页 |
| 1.3 嗜盐菌合成PHA | 第14-18页 |
| 1.3.1 嗜盐菌简介 | 第14-15页 |
| 1.3.2 极端嗜盐古菌合成PHA | 第15-16页 |
| 1.3.3 嗜盐细菌合成PHA | 第16-18页 |
| 1.4 PHA的合成途径 | 第18-23页 |
| 1.4.1 细菌中PHA合成途径 | 第18-21页 |
| 1.4.2 细菌天然PHA合成途径中的相关酶 | 第21-22页 |
| 1.4.3 极端嗜盐古菌PHA合成途径 | 第22-23页 |
| 1.5 PHA合成的关键酶——PHA合酶 | 第23-27页 |
| 1.5.1 PHA的一级结构 | 第23-24页 |
| 1.5.2 PHA合酶的分类 | 第24-25页 |
| 1.5.3 PHA合酶基因编码的组织形式 | 第25-26页 |
| 1.5.4 PHA合酶的分类二级结构和四级结构 | 第26-27页 |
| 1.6 PHA的降解 | 第27-28页 |
| 1.6.1 PHA的胞内降解 | 第27页 |
| 1.6.2 PHA的胞外降解 | 第27-28页 |
| 1.7 论文的工作内容、目的及意义 | 第28-30页 |
| 第二章 Halogranum amylolyticum TNN58胞内颗粒状物质的鉴定 | 第30-38页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 材料与方法 | 第30-32页 |
| 2.2.1 菌种 | 第30页 |
| 2.2.2 培养基及培养条件 | 第30-31页 |
| 2.2.3 胞内颗粒物的初步判断 | 第31页 |
| 2.2.4 GC分析 | 第31页 |
| 2.2.5 PHBV的提取方法 | 第31页 |
| 2.2.6 GC-MS | 第31-32页 |
| 2.2.7 NMR | 第32页 |
| 2.2.8 电镜观察 | 第32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-37页 |
| 2.3.1 电镜观察 | 第32-33页 |
| 2.3.2 胞内颗粒物的初步鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.3 GC鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.4 PHA的提取和纯化 | 第35页 |
| 2.3.5 GC-MS鉴定 | 第35页 |
| 2.3.6 NMR鉴定 | 第35-37页 |
| 2.4 结论 | 第37-38页 |
| 第三章 H.amylolyticum TNN58产PHBV的发酵条件优化 | 第38-53页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 材料与方法 | 第38-43页 |
| 3.2.1 培养基 | 第38-39页 |
| 3.2.2 生物量测定方法 | 第39页 |
| 3.2.3 发酵液残糖测定方法 | 第39页 |
| 3.2.4 PHBV定量分析方法 | 第39页 |
| 3.2.5 基础培养基确定的方法 | 第39页 |
| 3.2.6 考察不同NaCl浓度对H.amylolyticum TNN58积累PHBV产量的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.7 考察不同碳源对H.amylolyticum TNN58积累PHBV影响 | 第40页 |
| 3.2.8 考察不同浓度葡萄糖对于积累PHBV影响 | 第40页 |
| 3.2.9 考察不同氮源对积累PHBV影响 | 第40-41页 |
| 3.2.10 考察不同氮源浓度对积累PHBV的影响 | 第41页 |
| 3.2.11 考察不同浓度KCl对积累PHBV的影响 | 第41页 |
| 3.2.12 考察KH_2PO_4浓度对积累PHBV的影响 | 第41页 |
| 3.2.13 正交实验考察最佳发酵条件 | 第41-42页 |
| 3.2.14 摇瓶发酵中PHBV积累与菌体生长曲线的测定 | 第42页 |
| 3.2.15 丙酸添加PHBV发酵的影响 | 第42页 |
| 3.2.16 发酵罐分批发酵 | 第42页 |
| 3.2.17 分批补料发酵 | 第42-43页 |
| 3.3 实验结果 | 第43-52页 |
| 3.3.1 Na Cl浓度对葡萄糖浓度测定的影响 | 第43页 |
| 3.3.2 基础培养基确定 | 第43-44页 |
| 3.3.3 不同碳源对H.amylolyticum TNN58积累PHBV影响 | 第44页 |
| 3.3.4 不同 NaCl 浓度对菌体生长的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.5 不同浓度葡萄糖对于积累PHBV影响 | 第45-46页 |
| 3.3.6 不同氮源对H.amylolyticum TNN58积累PHBV影响 | 第46页 |
| 3.3.7 谷氨酸钠浓度对H.amylolyticum TNN58积累PHBV影响 | 第46-47页 |
| 3.3.8 KCl浓度对H.amylolyticum TNN58积累PHBV影响 | 第47-48页 |
| 3.3.9 KH_2PO_4浓度对H.amylolyticum TNN58积累PHBV的影响 | 第48页 |
| 3.3.10 发酵条件的优化 | 第48-49页 |
| 3.3.11 摇瓶发酵中PHBV积累与菌体生长曲线 | 第49-50页 |
| 3.3.12 丙酸添加对PHBV发酵的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.13 发酵罐分批发酵 | 第51页 |
| 3.3.14 发酵罐分批补料发酵 | 第51-52页 |
| 3.4 结论 | 第52-53页 |
| 第四章 R. eutropha H16和H.amylolyticum TNN58产PHBV材料学性能分析 | 第53-64页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 材料与方法 | 第53-56页 |
| 4.2.1 菌种 | 第53页 |
| 4.2.2 培养基及培养条件 | 第53-54页 |
| 4.2.3 PHBV纯化 | 第54页 |
| 4.2.4 膜的制备方法 | 第54页 |
| 4.2.5 热力学参数测定 | 第54页 |
| 4.2.6 分子量测定 | 第54-55页 |
| 4.2.7 机械性能测定 | 第55页 |
| 4.2.8 SEM分析 | 第55页 |
| 4.2.9 AFM测定 | 第55页 |
| 4.2.10 接触角和表面自由能测定 | 第55页 |
| 4.2.11 血液相容性测定 | 第55-56页 |
| 4.3 实验结果 | 第56-62页 |
| 4.3.1 PHBV-HA和PHBV-RE的制备 | 第56-57页 |
| 4.3.2 PHBV聚合物的物理特性表征 | 第57-60页 |
| 4.3.3 PHBV膜的表面特征 | 第60-61页 |
| 4.3.4 PHBV膜的生物相容性 | 第61-62页 |
| 4.4 小结 | 第62-64页 |
| 第五章 Halogranum amylolyticum TNN58PHA合酶的克隆及鉴定 | 第64-82页 |
| 5.1 引言 | 第64页 |
| 5.2 材料与方法 | 第64-72页 |
| 5.2.1 菌株 | 第64页 |
| 5.2.2 质粒 | 第64页 |
| 5.2.3 引物 | 第64-65页 |
| 5.2.4 常用酶 | 第65页 |
| 5.2.5 hiTail-PCR | 第65-66页 |
| 5.2.6 载体构建 | 第66-67页 |
| 5.2.7 H. hispanica PHB-1 转化试剂和方法 | 第67-69页 |
| 5.2.7.1 试剂的配制 | 第67-68页 |
| 5.2.7.2 转化方法 | 第68-69页 |
| 5.2.8 质粒的提取 | 第69页 |
| 5.2.8.1 大肠杆菌质粒提取 | 第69页 |
| 5.2.8.2 极端嗜盐古菌质粒提取 | 第69页 |
| 5.2.9 极端嗜盐古菌RNA的提取 | 第69页 |
| 5.2.10 RT-PCR | 第69-71页 |
| 5.2.10.1 蛋白的诱导表达 | 第70页 |
| 5.2.10.2 蛋白的纯化 | 第70-71页 |
| 5.2.11 抗体的制备 | 第71页 |
| 5.2.12 Western blot分析 | 第71-72页 |
| 5.3 实验结果 | 第72-81页 |
| 5.3.1 pha E和pha C的扩增 | 第72-75页 |
| 5.3.2 扩增片段的初步分析 | 第75-76页 |
| 5.3.3 扩增片段的初步分析 | 第76-77页 |
| 5.3.4 H.hispanica PHB-1/p WL102-pha EC的构建 | 第77-78页 |
| 5.3.5 pha E和pha C基因转录分析 | 第78-79页 |
| 5.3.6 pha E和pha C蛋白的Western blot分析 | 第79-80页 |
| 5.3.7 H. hispanica PHB-1 中PHA合酶互补实验 | 第80-81页 |
| 5.4 结论 | 第81-82页 |
| 第六章 H.amylolyticum TNN58全基因组测序及PHBV相关碳代谢途径分析 | 第82-94页 |
| 6.1 引言 | 第82页 |
| 6.2 材料与方法 | 第82-83页 |
| 6.2.1 菌株 | 第82页 |
| 6.2.2 基因组测序 | 第82页 |
| 6.2.3 基因组注释 | 第82页 |
| 6.2.4 PHA合酶分析 | 第82页 |
| 6.2.5 PHBV前体供应途径分析 | 第82页 |
| 6.2.6 PHBV降解酶分析 | 第82-83页 |
| 6.2.7 乙醛酸和天冬氨酸分析 | 第83页 |
| 6.3 实验结果 | 第83-93页 |
| 6.3.1 基因组测序 | 第83-84页 |
| 6.3.2 基因组测序初步分析 | 第84页 |
| 6.3.3 基因功能分析 | 第84页 |
| 6.3.4 丙酰CoA合成途径分析 | 第84-89页 |
| 6.3.5 PHA合酶分析 | 第89页 |
| 6.3.6 PHBV合成途径分析 | 第89-90页 |
| 6.3.7 乙醛酸循环和天冬氨酸循环分析 | 第90-91页 |
| 6.3.8 PHA降解分析 | 第91-93页 |
| 6.4 结论 | 第93-94页 |
| 主要结论与展望 | 第94-96页 |
| 论文主要创新点 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-104页 |
| 附录I 核酸序列 | 第104-119页 |
| 附录II 博士期间发表的论文 | 第119页 |
