| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-36页 |
| 1.1 解旋酶的生物学特征及作用机制 | 第12-20页 |
| 1.1.1 解旋酶概述 | 第12-13页 |
| 1.1.2 解旋酶家族的分类 | 第13-16页 |
| 1.1.3 解旋酶的作用机制 | 第16-18页 |
| 1.1.4 解旋酶的部分研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2 Pif1解旋酶的生物学特征及研究进展 | 第20-24页 |
| 1.2.1 Pif1解旋酶及其生物学功能 | 第20-22页 |
| 1.2.2 Pif1解旋酶的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.3 G4 DNA及研究进展 | 第24-28页 |
| 1.3.1 G4 DNA概述 | 第24-26页 |
| 1.3.2 G4 DNA的研究进展 | 第26-28页 |
| 1.4 解旋酶与DNA底物互作的研究方法 | 第28-34页 |
| 1.4.1 蛋白-DNA互作研究的经典方法 | 第28-30页 |
| 1.4.2 快速停留荧光检测技术（stopped-flow Fluorometric Techniques） | 第30-32页 |
| 1.4.3 单分子技术（Single-Molecule Methods） | 第32-34页 |
| 1.5 本课题的研究目的和意义 | 第34-36页 |
| 第二章 BsPif1解旋酶的生化特征与解旋机理的研究 | 第36-71页 |
| 2.1 材料与方法 | 第37-46页 |
| 2.1.1 实验试剂、材料与仪器 | 第37-39页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第39-46页 |
| 2.2 结果与分析 | 第46-68页 |
| 2.2.1 BsPif1蛋白的纯化与寡聚状态分析 | 第46-50页 |
| 2.2.2 BsPif1解旋酶的基本生化特征分析 | 第50-55页 |
| 2.2.3 BsPif1解旋酶可以结合各种结构类型的DNA底物 | 第55-57页 |
| 2.2.4 BsPif1解旋酶可以解旋多种DNA底物，但是最佳底物为含 5’-尾链的部分双链DNA | 第57-60页 |
| 2.2.5 BsPif1介导DNA解旋反应的动力学特征参数 | 第60-62页 |
| 2.2.6 BsPif1解旋类似复制中间体结构的特异DNA底物 | 第62-63页 |
| 2.2.7 BsPif1解旋RNA-茎环结构与DNA/RNA杂交双链底物 | 第63-66页 |
| 2.2.8 BsPif1催化G4 DNA的解旋动力学研究 | 第66-68页 |
| 2.3 讨论 | 第68-70页 |
| 2.4 小结 | 第70-71页 |
| 第三章 G4激活Sc Pif1蛋白解旋双链DNA的动力学研究 | 第71-99页 |
| 引言 | 第71-72页 |
| 3.1 材料与方法 | 第72-78页 |
| 3.1.1 实验材料与试剂 | 第72-73页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第73-78页 |
| 3.2 结果与分析 | 第78-95页 |
| 3.2.1 重组蛋白的表达纯化 | 第78-80页 |
| 3.2.2 Sc Pif1蛋白介导G4 DNA解旋反应的动力学特性测试的实验设计 | 第80-82页 |
| 3.2.3 Sc Pif1蛋白催化的G4 DNA解旋反应具有ATP依赖特性 | 第82-83页 |
| 3.2.4 G4 DNA强烈激活Sc Pif1解旋酶介导的双链DNA的解旋反应 | 第83-86页 |
| 3.2.5 G4结构可以激活Pif1蛋白催化复制起点上游双链DNA的解旋活性 | 第86-87页 |
| 3.2.6 Pif1可以解旋冈崎片段成熟过程中含G4 DNA的分支“皮瓣”结构 | 第87-88页 |
| 3.2.7 Sc Pif1解旋G4 DNA的特异动力学参数反映出G4激活双链DNA的本质特征 | 第88-90页 |
| 3.2.8 G4 DNA激活Sc Pif1解旋酶解旋双链DNA机制的研究 | 第90-95页 |
| 3.3 讨论 | 第95-98页 |
| 3.3.1 G4激活Pif1蛋白解旋双链DNA现象的发现及其机制 | 第95-96页 |
| 3.3.2 G4激活Sc Pif1蛋白解旋双链DNA活性的生物学意义 | 第96-98页 |
| 3.4 小结 | 第98-99页 |
| 第四章 Pif1蛋白解旋G4 DNA单分子机理的研究 | 第99-128页 |
| 引言 | 第99-100页 |
| 4.1 材料与方法 | 第100-107页 |
| 4.1.1 材料与试剂 | 第100页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第100-107页 |
| 4.2 结果与分析 | 第107-125页 |
| 4.2.1 相关重组蛋白的构建、纯化与荧光标记 | 第107-110页 |
| 4.2.2 制备单分子FRET研究中的G4底物 | 第110-113页 |
| 4.2.3 Pif1蛋白催化G4解旋与再折叠的往复过程 | 第113-116页 |
| 4.2.4 Pif1蛋白分两步解旋G4 DNA | 第116-117页 |
| 4.2.5 利用Cy3-标记Pif1蛋白研究该解旋酶解旋G4 DNA时的定位 | 第117-121页 |
| 4.2.6 Pif1蛋白反复解旋G3结构 | 第121-123页 |
| 4.2.7 Pif1蛋白反复解旋G4 DNA的分子机制 | 第123-125页 |
| 4.3 讨论 | 第125-127页 |
| 4.3.1 Pif1蛋白分两步解旋G4结构分子机制的提出 | 第125-126页 |
| 4.3.2 Pif1解旋酶反复解旋G4结构有助于解救停滞中的复制叉 | 第126页 |
| 4.3.3 G3结构在Pif1反复解旋G4 DNA的过程中发挥重要作用 | 第126-127页 |
| 4.4 小结 | 第127-128页 |
| 第五章 结论与创新点 | 第128-131页 |
| 5.1 结论 | 第128-130页 |
| 5.2 创新点 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-149页 |
| 附录1 公式的推导 | 第149-150页 |
| 附录2 第二章所用的底物结构与序列信息 | 第150-152页 |
| 附录3 第三章中动力学测试的底物序列信息 | 第152-154页 |
| 附录4 本研究常规生化实验中使用的仪器设备 | 第154-155页 |
| 附录5 本研究主要的常规生化试剂 | 第155-156页 |
| 附录6 本研究中常规缓冲溶液的配制 | 第156-159页 |
| 缩略词表 | 第159-160页 |
| 致谢 | 第160-161页 |
| 作者简介 | 第161页 |
