| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 Hedgehog信号通路概述 | 第10-12页 |
| 1.2 Hedgehog信号通路与肿瘤的关系 | 第12页 |
| 1.3 Hedgehog通路异常位点和肿瘤治疗的靶点选择 | 第12-13页 |
| 1.3.1 以HH配基为靶点的抑制剂 | 第13页 |
| 1.3.2 以SMO为靶点的抑制剂 | 第13页 |
| 1.3.3 以Gli蛋白为靶点的抑制剂 | 第13页 |
| 1.4 Gli1简介 | 第13-15页 |
| 1.4.1 Gli1蛋白的结构 | 第14-15页 |
| 1.4.2 Gli1功能 | 第15页 |
| 1.5 GRIP1概述 | 第15-19页 |
| 1.5.1 GRIP1的发现 | 第16-17页 |
| 1.5.2 GRIP1蛋白的基本结构 | 第17页 |
| 1.5.3 GRIP1蛋白的翻译后修饰以及生物学功能 | 第17-18页 |
| 1.5.4 GRIP1蛋白的与疾病的关系 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究的选题依据和研究内容 | 第19-21页 |
| 1.6.1 选题依据 | 第19页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第19-21页 |
| 2 Glil和GRIP1全长和缺失体等质粒的构建 | 第21-42页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第21-23页 |
| 2.2.1 仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.2 实验试剂与器材 | 第22-23页 |
| 2.2.3 实验使用细菌、动物细胞和目的质粒 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-38页 |
| 2.3.1 感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| 2.3.2 提取质粒 | 第24页 |
| 2.3.3 肿瘤细胞培养 | 第24页 |
| 2.3.4 质粒转染 | 第24-25页 |
| 2.3.5 裂解细胞 | 第25页 |
| 2.3.6 Western blotting | 第25-26页 |
| 2.3.7 不同载体和标签的Gli1全长及缺失体的构建 | 第26-33页 |
| 2.3.8 不同载体和标签的GRIP1全长及缺失体的构建 | 第33-38页 |
| 2.4 实验结果 | 第38-41页 |
| 2.4.1 pCMV10-3×Flag-Gli1全长及缺失体的构建及其在细胞中的表达 | 第38-39页 |
| 2.4.2 pACT-Gli1和pBID-Gli1全长及缺失体的构建 | 第39-40页 |
| 2.4.3 GFP-GRIP1缺失体的构建及其在细胞中的表达 | 第40-41页 |
| 2.4.4 pACT-GRIP1和pBID-GRIP1全长及缺失体的构建 | 第41页 |
| 2.5 小结 | 第41-42页 |
| 3 GRIP1对Gli1转录活性的影响 | 第42-52页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第42-43页 |
| 3.2.1 仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.2 试剂与材料 | 第43页 |
| 3.2.3 实验使用的细菌、动物细胞和质粒 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-45页 |
| 3.3.1 质粒提取 | 第43-44页 |
| 3.3.2 动物细胞培养 | 第44页 |
| 3.3.3 质粒转染 | 第44页 |
| 3.3.4 荧光素酶报告基因实验 | 第44-45页 |
| 3.4 实验结果 | 第45-51页 |
| 3.4.1 GRIP1对Gli转录因子转录活性的影响 | 第45-47页 |
| 3.4.2 GRIP1的浓度对Gli1转录活性的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.3 敲除GRIP1对Gli1转录活性的影响 | 第48页 |
| 3.4.4 GRIP1影响Gli1转录活性的区域 | 第48-50页 |
| 3.4.5 GRIP1对Gli3的转录活性的影响 | 第50-51页 |
| 3.5 小结 | 第51-52页 |
| 4 GRIP1与Gli1相互作用的确定 | 第52-62页 |
| 4.1 引言 | 第52页 |
| 4.2 仪器与试剂 | 第52-53页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第52页 |
| 4.2.2 试剂 | 第52页 |
| 4.2.3 细菌、细胞和质粒 | 第52-53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-54页 |
| 4.3.1 哺乳动物细胞双杂交实验研究GRIP1与Gli1相互作用 | 第53-54页 |
| 4.3.2 细胞免疫荧光方法确定GRIP1与Gli1细胞定位 | 第54页 |
| 4.4 实验结果 | 第54-61页 |
| 4.4.1 研究GRIP1与Gli1两者是否存在相互作用 | 第54-56页 |
| 4.4.2 研究GRIP1与Gli1之间亚细胞共定位 | 第56-58页 |
| 4.4.3 Glil与GRIP1的相互作用区域的研究 | 第58-59页 |
| 4.4.4 GRIP1与Gli1的407—1020aa的相互作用区域的研究 | 第59-60页 |
| 4.4.5 免疫共沉淀实验研究缺失体之间是否存在相互作用 | 第60-61页 |
| 4.5 小结 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
