| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-23页 |
| 1 埃博霉素研究进展 | 第13-20页 |
| 1.1 埃博霉素概述 | 第13页 |
| 1.2 埃博霉素的结构及理化性质 | 第13-14页 |
| 1.3 埃博霉素的作用机理 | 第14-15页 |
| 1.4 埃博霉素临床研究 | 第15-17页 |
| 1.5 埃博霉素的生物合成 | 第17-20页 |
| 2 提高埃博霉素产量的策略 | 第20-22页 |
| 2.1 通过异源表达促进埃博霉素的表达水平 | 第20-21页 |
| 2.2 通过改善发酵条件提高埃博霉素的产量 | 第21-22页 |
| 3 立题依据和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 埃博霉素发酵条件研究 | 第23-42页 |
| 1 研究背景 | 第23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 供试细胞株 | 第23页 |
| 2.1.3 细菌培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.4 细胞培养基 | 第24页 |
| 2.1.5 引物合成 | 第24-25页 |
| 2.1.6 主要试剂盒及试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.7 主要溶液配制 | 第26页 |
| 2.1.8 仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.2 研究方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 埃博霉素工程菌形态特征观察 | 第27页 |
| 2.2.2 伯克氏菌基因组提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3 埃博霉素基因扩增 | 第28页 |
| 2.2.4 埃博霉素工程菌发酵产物的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.5 X-AD16树脂处理 | 第29页 |
| 2.2.6 埃博霉素的质谱鉴定 | 第29页 |
| 2.2.7 埃博霉素工程菌发酵粗提物的抗肿瘤活性检测 | 第29-30页 |
| 2.2.8 生长曲线测定 | 第30-31页 |
| 2.2.9 前体物质发酵实验 | 第31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-40页 |
| 3.1 埃博霉素工程菌菌体形态观察 | 第31-32页 |
| 3.2 埃博霉素在工程菌中的表达检测 | 第32-34页 |
| 3.2.1 伯克氏菌基因簇的提取 | 第32页 |
| 3.2.2 埃博霉素基因PCR检测 | 第32-33页 |
| 3.2.3 LC/MS/MS检测埃博霉素在工程菌中的表达 | 第33-34页 |
| 3.3 埃博霉素工程菌发酵产物抗肿瘤活性检测 | 第34-36页 |
| 3.4 埃博霉素工程菌发酵条件研究 | 第36-40页 |
| 3.4.1 菌含量与抗肿瘤细胞活性关系研究 | 第36-38页 |
| 3.4.2 不同前体物质对工程菌埃博霉素效价影响 | 第38-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 4.1 埃博霉素工程菌培养条件优化意义 | 第40页 |
| 4.2 菌体细胞浓度对埃博霉素产量的影响 | 第40-41页 |
| 4.3 前体物质对埃博霉素产量的影响 | 第41-42页 |
| 第三章 含有不同启动子质粒的构建 | 第42-63页 |
| 1 研究背景 | 第42-45页 |
| 1.1 四环素诱导启动子 | 第42-43页 |
| 1.2 阿拉伯糖诱导启动子 | 第43-44页 |
| 1.3 Red/ET重组 | 第44-45页 |
| 2 实验材料和方法 | 第45-56页 |
| 2.1 实验材料 | 第45-49页 |
| 2.1.1 供试菌株及质粒 | 第45-46页 |
| 2.1.2 培养基及抗生素浓度 | 第46页 |
| 2.1.3 引物合成 | 第46-47页 |
| 2.1.4 主要试剂及试剂盒 | 第47-48页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第48-49页 |
| 2.2 研究方法 | 第49-56页 |
| 2.2.1 PCR扩增 | 第49页 |
| 2.2.2 DNA片段的连接 | 第49页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第49-50页 |
| 2.2.4 大肠杆菌的转化 | 第50-51页 |
| 2.2.5 Red/ET同源重组 | 第51页 |
| 2.2.6 E.coli中质粒的小量提取和酶切鉴定 | 第51-52页 |
| 2.2.7 pR6K-Amp-H.a-f-P_(Tet)-H.a-r质粒的构建 | 第52-54页 |
| 2.2.8 pR6K-Amp-H.a-f-P_(BAD)-H.a-r质粒的构建 | 第54-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-62页 |
| 3.1 pR6K-Amp-H.a-f-P_(Tet)-H.a-r质粒的鉴定 | 第56-60页 |
| 3.2 pR6K-Amp-H.a-f-P_(BAD)-H.a-r质粒的鉴定 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-63页 |
| 4.1 构建强启动子质粒的意义 | 第62页 |
| 4.2 Red/ET同源重组技术构建重组载体的优势 | 第62-63页 |
| 第四章 主要结论和今后研究设想 | 第63-64页 |
| 1 主要结论 | 第63页 |
| 2 今后工作设想 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72-73页 |
