| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 经典模式生物斑马鱼的研究现状 | 第11-13页 |
| 1.1.1 细菌及病毒感染斑马鱼模型的研究 | 第11-12页 |
| 1.1.2 斑马鱼模型与人类疾病的研究 | 第12-13页 |
| 1.2 真核生物DNA聚合酶 δ 的研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.1 DNA聚合酶 δ 的亚基组成及功能 | 第13-14页 |
| 1.2.2 DNA pol δ-杆状病毒表达系统的建立 | 第14-15页 |
| 1.2.3 DNA聚合酶 δ 与人类疾病 | 第15-16页 |
| 1.3 细胞增殖抗原PCNA的研究现状 | 第16-18页 |
| 1.4 石斑鱼及其疾病模型研究进展 | 第18-21页 |
| 1.4.1 NF-κB信号通路在鱼类先天性免疫中的作用的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.4.2 石斑鱼及其疾病研究 | 第20-21页 |
| 1.5 立题依据及研究内容 | 第21-24页 |
| 1.5.1 本论文的立题依据 | 第21-23页 |
| 1.5.2 本论文的研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 斑马鱼DNA pol δ 四亚基基因的克隆、重组病毒的制备及真核表达 | 第24-56页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第24-29页 |
| 2.1.1 实验用鱼种、载体、受体菌及细胞株 | 第24页 |
| 2.1.2 主要的实验仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.3 实验试剂及配制方法 | 第25-29页 |
| 2.2 方法 | 第29-43页 |
| 2.2.1 斑马鱼mRNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2 斑马鱼cDNA模板的合成 | 第30-31页 |
| 2.2.3 相关的引物设计 | 第31-32页 |
| 2.2.4 斑马鱼DNA pol δ 四亚基与pFBDM重组质粒的构建 | 第32-39页 |
| 2.2.5 蓝白斑筛选重组Bacmids | 第39-40页 |
| 2.2.6 Sf-9 细胞的悬浮培养 | 第40页 |
| 2.2.7 脂质体包埋法制备重组病毒 | 第40-41页 |
| 2.2.8 目的蛋白的表达与Western Blot检测 | 第41-43页 |
| 2.2.9 质谱鉴定样品 | 第43页 |
| 2.3 结果与分析 | 第43-54页 |
| 2.3.1 斑马鱼DNA聚合酶Delta四亚基基因的克隆结果分析 | 第43-47页 |
| 2.3.2 斑马鱼DNA pol δ 四亚基不同组合重组Bacmids的PCR鉴定 | 第47-48页 |
| 2.3.3 各亚基组合在真核系统中表达分析 | 第48-52页 |
| 2.3.4 质谱鉴定分析 | 第52-54页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 斑马鱼细胞增殖抗原（PCNA）的克隆与原核表达纯化及应用 | 第56-72页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第56-57页 |
| 3.1.1 材料 | 第56页 |
| 3.1.2 试剂 | 第56-57页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第57页 |
| 3.2 方法 | 第57-64页 |
| 3.2.1 一般实验方法 | 第57页 |
| 3.2.2 斑马鱼PCNA基因的重组构建 | 第57-58页 |
| 3.2.3 PCNA蛋白在大肠杆菌E. coli BL21(DE3)中诱导表达 | 第58-59页 |
| 3.2.4 目的蛋白的分离纯化 | 第59-61页 |
| 3.2.5 目的蛋白与CNBr-activated SepharoseTM 4B耦联 | 第61-62页 |
| 3.2.6 目的蛋白-SepharoseTM 4B亲和层析柱的应用 | 第62-64页 |
| 3.3 结果与分析 | 第64-70页 |
| 3.3.1 斑马鱼PCNA的基因克隆分析 | 第64-65页 |
| 3.3.2 斑马鱼PCNA蛋白的诱导表达 | 第65-66页 |
| 3.3.3 斑马鱼PCNA蛋白的大规模分离纯化 | 第66-67页 |
| 3.3.4 PCNA亲和层析柱的制备及应用 | 第67-69页 |
| 3.3.5 QE质谱结果分析 | 第69-70页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第70-72页 |
| 第四章 赤点石斑鱼NF-κB因子抑制蛋白IκBα 基因的分子克隆与功能研究 | 第72-88页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第72页 |
| 4.1.1 实验动物、细胞、病毒及其它微生物细胞 | 第72页 |
| 4.1.2 质粒载体和受体菌株 | 第72页 |
| 4.1.3 试剂盒及试剂 | 第72页 |
| 4.2 方法 | 第72-79页 |
| 4.2.1 SGIV病毒的扩增 | 第72-73页 |
| 4.2.2 组织样品的采集及免疫刺激 | 第73页 |
| 4.2.3 赤点石斑鱼mRNA提取及cDNA的合成 | 第73页 |
| 4.2.4 相关引物设计 | 第73-74页 |
| 4.2.5 以 5'-和 3'-RACE技术扩增目的基因编码序列 | 第74-76页 |
| 4.2.6 pET28a-EaIκBα 原核表达重组质粒的构建 | 第76-77页 |
| 4.2.7 重组蛋白的诱导表达 | 第77-78页 |
| 4.2.8 实时荧光定量PCR检测EaIκBα mRNA表达 | 第78页 |
| 4.2.9 EaIκBα 抗病毒活性分析 | 第78-79页 |
| 4.3 结果与分析 | 第79-86页 |
| 4.3.1 EaIκBα 全长扩增和序列分析 | 第79-80页 |
| 4.3.2 EaIκBα 氨基酸序列的同源性分析及进化关系 | 第80-82页 |
| 4.3.3 石斑鱼EaIκBα 基因表达模式分析 | 第82-84页 |
| 4.3.4 EaIκBα 的原核表达结果分析 | 第84页 |
| 4.3.5 EaIκBα 抗病毒活性分析 | 第84-86页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第86-88页 |
| 总结与展望 | 第88-90页 |
| 总结 | 第88-89页 |
| 展望 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 在学期间发表的学术论文及其他科研成果 | 第99页 |
