| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第18-39页 |
| 1.1 肿瘤的诱因 | 第18-23页 |
| 1.1.1 吸烟 | 第18-19页 |
| 1.1.2 饮食因素 | 第19页 |
| 1.1.3 肥胖和锻炼 | 第19-20页 |
| 1.1.4 饮酒 | 第20页 |
| 1.1.5 传染性病原体 | 第20-21页 |
| 1.1.6 化学元素和污染 | 第21页 |
| 1.1.7 生殖因素和外源激素 | 第21页 |
| 1.1.8 能量和生长因子 | 第21-22页 |
| 1.1.9 电离辐射和非电离辐射 | 第22页 |
| 1.1.10 治疗和药物作用 | 第22-23页 |
| 1.1.11 基因因素 | 第23页 |
| 1.2 肿瘤的治疗 | 第23-27页 |
| 1.2.1 针对不同癌症的个体化治疗 | 第23-24页 |
| 1.2.2 端粒酶的免疫治疗 | 第24页 |
| 1.2.3 恶性肿瘤的磁介导热疗 | 第24-25页 |
| 1.2.4 声动力治疗 | 第25页 |
| 1.2.5 纳米技术治疗 | 第25-26页 |
| 1.2.6 细胞免疫治疗和干细胞移植治疗 | 第26页 |
| 1.2.7 单克隆抗体治疗 | 第26-27页 |
| 1.2.8 RNAi治疗 | 第27页 |
| 1.3 TNFAIP8家族的研究现状 | 第27-30页 |
| 1.3.1 TNFAIP8家族成员和结构 | 第28页 |
| 1.3.2 TNFAIP8各成员的分布 | 第28-29页 |
| 1.3.3 TNFAIP8与肿瘤 | 第29-30页 |
| 1.4 RNA干扰的研究现状 | 第30-37页 |
| 1.4.1 RNA干扰的作用和机制 | 第30-31页 |
| 1.4.2 RNAi的分类 | 第31-36页 |
| 1.4.2.1 miRNA | 第31-34页 |
| 1.4.2.2 shRNA | 第34-36页 |
| 1.4.2.3 dsRNA | 第36页 |
| 1.4.2.4 siRNA | 第36页 |
| 1.4.3 RNAi与肿瘤的关系 | 第36-37页 |
| 1.5 实验方案设计 | 第37-39页 |
| 1.5.1 研究目的和意义 | 第37页 |
| 1.5.2 研究目标 | 第37页 |
| 1.5.3 研究内容 | 第37-39页 |
| 第二章 TNFAIP8原核表达质粒的构建表达及其抗体的筛选 | 第39-68页 |
| 2.1 材料和方法 | 第39-57页 |
| 2.1.1 材料 | 第39-46页 |
| 2.1.1.1 TNFAIP8 cDNA、双酶切引物、质粒载体 | 第39页 |
| 2.1.1.2 主要试剂及耗材 | 第39-40页 |
| 2.1.1.3 主要仪器及设备 | 第40页 |
| 2.1.1.4 主要溶液的配制 | 第40-46页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第46-57页 |
| 2.1.2.1 根据TNFAIP8序列及PET-22b(+)特性设计引物 | 第46-47页 |
| 2.1.2.2 表达载体的构建与转化 | 第47-50页 |
| 2.1.2.3 重组子的筛选和序列分析 | 第50-51页 |
| 2.1.2.4 目的蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第51-52页 |
| 2.1.2.5 目的蛋白的过柱纯化和复性 | 第52-54页 |
| 2.1.2.6 Western-Blot检测TNFAIP8蛋白表达 | 第54-55页 |
| 2.1.2.7 多克隆抗体的制备和特性鉴定 | 第55-56页 |
| 2.1.2.8 单克隆抗体的制备和特性鉴定 | 第56-57页 |
| 2.2 结果与分析 | 第57-64页 |
| 2.2.1 PET22b(+)质粒图谱和酶切位点 | 第57页 |
| 2.2.2 TNFAIP8 PCR引物的设计及扩增 | 第57-58页 |
| 2.2.3 双酶切及回收后连接 | 第58页 |
| 2.2.4 重组子的筛选和测序 | 第58-60页 |
| 2.2.4.1 重组子的初筛 | 第58-59页 |
| 2.2.4.2 重组子的复筛 | 第59页 |
| 2.2.4.3 筛选阳性菌落的测序 | 第59-60页 |
| 2.2.5 目的蛋白的表达 | 第60-62页 |
| 2.2.5.1 高表达菌种的筛选 | 第60页 |
| 2.2.5.2 高表达菌株最适IPTG浓度的确定 | 第60-61页 |
| 2.2.5.3 最适诱导时间的确定 | 第61页 |
| 2.2.5.4 目的蛋白的高效表达和纯化 | 第61-62页 |
| 2.2.6 TNFAIP8蛋白的Western-Blot鉴定 | 第62页 |
| 2.2.7多克隆抗体的制备和特性鉴定 | 第62-63页 |
| 2.2.7.1 多克隆抗体的ELISA鉴定 | 第62-63页 |
| 2.2.7.2 多克隆抗体的Western-Blot鉴定 | 第63页 |
| 2.2.7.3 多克隆抗体的免疫组化鉴定 | 第63页 |
| 2.2.8 单克隆抗体的制备和特性鉴定 | 第63-64页 |
| 2.2.8.1 单克隆抗体的ELISA鉴定 | 第63-64页 |
| 2.2.8.2 单克隆抗体的Western-Blot鉴定 | 第64页 |
| 2.3 讨论 | 第64-68页 |
| 第三章 TNFAIP8干扰质粒的构建及最佳干扰效率质粒的筛选 | 第68-90页 |
| 3.1 材料与方法 | 第68-82页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第68-72页 |
| 3.1.1.1 质粒、引物、菌株和细胞 | 第68页 |
| 3.1.1.2 主要试剂及耗材 | 第68-69页 |
| 3.1.1.3 主要仪器及设备 | 第69页 |
| 3.1.1.4 主要溶液的配制 | 第69-72页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第72-82页 |
| 3.1.2.1 质粒pSIREN-RetroQ的转化 | 第72页 |
| 3.1.2.2 质粒pSIREN-RetroQ的提取 | 第72-74页 |
| 3.1.2.3 质粒pSIREN-RetroQ双酶切及回收 | 第74-75页 |
| 3.1.2.4 RNA干扰片段的设计与合成 | 第75-76页 |
| 3.1.2.5 互补片段退火 | 第76-77页 |
| 3.1.2.6 目的基因与载体的连接 | 第77页 |
| 3.1.2.7 重组质粒的转化、鉴定及测序 | 第77-78页 |
| 3.1.2.8 人肺腺癌细胞系A549细胞培养、转染及检测 | 第78-82页 |
| 3.2 结果与分析 | 第82-88页 |
| 3.2.1 pSIREN-RetroQ质粒图谱和酶切位点 | 第82-83页 |
| 3.2.2 干扰互补片段的退火及鉴定 | 第83页 |
| 3.2.3 pSIREN-RetroQ质粒酶切回收及连接 | 第83-84页 |
| 3.2.4 TNFAIP8-shRNA-pSIREN-RetroQ重组质粒阳性克隆初筛鉴定 | 第84页 |
| 3.2.5 TNFAIP8-shRNA-pSIREN-RetroQ重组质粒阳性克隆复筛鉴定 | 第84-85页 |
| 3.2.6 TNFAIP8-shRNA-pSIREN-RetroQ测序结果比对 | 第85页 |
| 3.2.7人肺腺癌细胞系A549细施培养及转染 | 第85-86页 |
| 3.2.8 RT-PCR检测TNFAIP8-shRNA-pSIREN-RetroQ 质粒干扰效率 | 第86页 |
| 3.2.9 Western-Blot检测TNFAIP8-shRNA-pSIREN-RetroQ质粒干扰效率 | 第86-87页 |
| 3.2.10 流式检测TNFAIP8-shRNA-pSIREN-RetroQ干扰质粒活性 | 第87-88页 |
| 3.3 讨论 | 第88-90页 |
| 总结 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 研究生在学期间发表文章 | 第102页 |
