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小麦泛素基因Ta-Ub2改善短柄草非生物胁迫耐性研究

中文摘要第9-11页
Abstract第11-12页
1 前言第13-24页
    1.1 泛素/26S蛋白酶体系统第13页
    1.2 泛素第13-16页
        1.2.1 泛素的结构第14-15页
        1.2.2 泛素的分布第15页
        1.2.3 泛素的种类第15-16页
    1.3 泛素启动酶系统第16-18页
        1.3.1 泛素活化酶(E1)第16-17页
        1.3.2 泛素结合酶(E2)第17页
        1.3.3 泛素连接酶(E3)第17-18页
    1.4 26S蛋白酶体第18-19页
    1.5 泛素/26S蛋白酶体途径的功能第19-21页
        1.5.1 泛素/26S蛋白酶体途径与植物激素信号途径第19-20页
        1.5.2 泛素/26S蛋白酶体途径参与细胞周期调控第20页
        1.5.3 泛素/26S蛋白酶体途径参与生物的胁迫适应过程第20-21页
    1.6 植物启动子的研究进展第21-23页
        1.6.1 组成型启动子第21-22页
        1.6.2 诱导型启动子第22页
        1.6.3 组织特异性启动子第22-23页
    1.7 本研究的目的及意义第23-24页
2 材料与方法第24-40页
    2.1 实验材料第24-26页
        2.1.1 植物材料第24页
        2.1.2 小麦与短柄草的培养及处理第24页
            2.1.2.1 用于遗传转化的短柄草实验材料的培养第24页
            2.1.2.2 用于基因克隆与基因表达分析的小麦实验材料的处理第24页
            2.1.2.3 实验材料的处理第24页
        2.1.3 菌株与转化质粒第24页
        2.1.4 酶与生化试剂第24-25页
        2.1.5 实验引物第25-26页
    2.2 实验方法第26-40页
        2.2.1 CTAB法提取短柄草基因组DNA第26页
        2.2.2 Trizol法提取RNA第26-27页
        2.2.3 反转录cDNA第一条链的合成第27页
        2.2.4 Ta-Ub2基因的克隆第27-28页
        2.2.5 琼脂糖凝胶回收第28页
        2.2.6 链接反应第28页
        2.2.7 大肠杆菌感受态细胞的转化第28-29页
        2.2.8 菌落筛选第29页
        2.2.9 DNA序列测定第29页
        2.2.10 大肠杆菌质粒DNA的提取第29-30页
        2.2.11 表达载体的构建第30页
        2.2.12 农杆菌转化第30-31页
        2.2.13 短柄草转化第31-33页
            2.2.13.1 愈伤组织诱导第31页
            2.2.13.2 农杆菌侵染愈伤组织第31页
            2.2.13.3 转基因植株的筛选与再生第31-32页
            2.2.13.4 转基因短柄草的PCR鉴定第32页
            2.2.13.5 荧光定量PCR第32-33页
        2.2.14 蛋白杂交检测第33-36页
            2.2.14.1 植物总蛋白的提取第33页
            2.2.14.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第33-34页
            2.2.14.3 半干法蛋白转移第34-35页
            2.2.14.4 封闭及杂交第35-36页
        2.2.15 生理指标测定第36-39页
            2.2.15.1 失水速率的测定第36页
            2.2.15.2 叶片相对含水量的测定第36页
            2.2.15.3 叶绿素含量的测定第36页
            2.2.15.4 土壤含水量的测定第36-37页
            2.2.15.5 叶片渗透势的测定第37页
            2.2.15.6 脯氨酸含量的测定第37页
            2.2.15.7 可溶性糖的测定(蒽酮法)第37-38页
            2.2.15.8 DAB和NBT染色第38页
            2.2.15.9 过氧化氢含量的测定第38页
            2.2.15.10 超氧阴离子自由基的测定第38页
            2.2.15.11 丙二醛(MDA)的含量测定第38-39页
            2.2.15.12 抗氧化酶活性的测定第39页
            2.2.15.13 电导法测量植物电解质外渗第39页
        2.2.16 统计分析第39-40页
3 结果与分析第40-55页
    3.1 Ta-Ub2序列系统进化分析第40页
    3.2 Ta-Ub2基因在小麦中的表达模式分析第40-41页
        3.2.1 Ta-Ub2基因在小麦不同部位的表达第40-41页
        3.2.2 Ta-Ub2基因对不同非生物胁迫处理的响应模式第41页
    3.3 转基因短柄草的获得第41-44页
        3.3.1 表达载体的构建第41-42页
        3.3.2 短柄草的遗传转化第42-43页
        3.3.3 转基因短柄草的筛选鉴定第43-44页
    3.4 转基因短柄草植株的表型分析第44-45页
    3.5 Ta-Ub2基因在短柄草逆境适应中的功能分析第45-48页
        3.5.1 转Ta-Ub2基因短柄草在干旱胁迫下的生长分析第45-46页
        3.5.2 过表达与诱导表达小麦Ta-Ub2基因对短柄草盐胁迫和低温胁迫耐性的影响第46-48页
    3.6 过表达与诱导表达小麦Ta-Ub2基因提高短柄草抗逆性的生理生化及分子机制分析第48-50页
        3.6.1 干旱胁迫下Ta-Ub2的过表达提高了短柄草多聚泛素蛋白的积累第48-49页
        3.6.2 干旱胁迫对转基因短柄草渗透调节能力的影响第49-50页
    3.7 过表达与诱导表达Ta-Ub2基因对转基因短柄草抗氧化能力的影响第50-55页
        3.7.1 干旱胁迫对转基因短柄草过氧化氢含量和超氧阴离子自由基产生速率的影响第50-51页
        3.7.2 干旱胁迫对转基因短柄草蛋白质羰基化水平及MDA含量的影响第51-52页
        3.7.3 干旱胁迫对转基因短柄草抗氧化酶活性的影响第52-53页
        3.7.4 干旱胁迫对转基因短柄草抗氧化酶相关基因及CBF转录因子基因表达的影响第53-55页
4 讨论第55-59页
5 结论第59-60页
参考文献第60-67页
致谢第67-68页
攻读学位期间发表论文情况第68页

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