| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 转录因子 | 第12-15页 |
| 1.1.1 转录因子的定义 | 第12页 |
| 1.1.2 转录因子的结构和分类 | 第12-14页 |
| 1.1.2.1 转录因子的结构 | 第12-13页 |
| 1.1.2.2 转录因子的分类 | 第13-14页 |
| 1.1.3 转录因子的调控 | 第14-15页 |
| 1.2 转录辅激活因子 | 第15-18页 |
| 1.2.1 转录辅激活因子的定义 | 第16-17页 |
| 1.2.2 转录辅激活因子的结构和分类 | 第17-18页 |
| 1.2.2.1 转录辅激活因子的结构 | 第17-18页 |
| 1.2.2.2 转录辅激活因子的分类 | 第18页 |
| 1.3 mbf1基因的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.4 抗寒性研究进展 | 第20-23页 |
| 1.4.1 冷胁迫 | 第20-21页 |
| 1.4.2 冷胁迫对动植物的影响 | 第21页 |
| 1.4.3 冷胁迫信号及转录调控 | 第21-23页 |
| 1.5 本实验的目的意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-46页 |
| 2.1 实验材料及仪器 | 第25-31页 |
| 2.1.1 果蝇品系 | 第25页 |
| 2.1.2 实验使用的药品试剂及各种试剂盒 | 第25-26页 |
| 2.1.3 信息检索网站和图像处理软件 | 第26页 |
| 2.1.4 主要仪器及耗材 | 第26-27页 |
| 2.1.5 实验引物及MBF1的序列号 | 第27-30页 |
| 2.1.6 试剂配制 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-46页 |
| 2.2.1 胚胎固定及保存 | 第31页 |
| 2.2.2 胚胎免疫抗体染色 | 第31-32页 |
| 2.2.3 果蝇原基抗体染色 | 第32-33页 |
| 2.2.4 果蝇培养 | 第33页 |
| 2.2.5 果蝇培养基的制备 | 第33页 |
| 2.2.6 果蝇产卵培养基的制备 | 第33页 |
| 2.2.7 果蝇饲养培养基的制作方法 | 第33-34页 |
| 2.2.8 三龄幼虫的冷处理 | 第34页 |
| 2.2.9 果蝇成虫的收集与处理 | 第34页 |
| 2.2.10 动物总RNA的提取方法 | 第34-35页 |
| 2.2.11 检测提取的RNA溶液的质量 | 第35-36页 |
| 2.2.12 反转录合成定量所需cDNA | 第36页 |
| 2.2.13 PCR 筛选合适的引物（使用 2×Taq PCR Master Mix 试剂盒做） | 第36-37页 |
| 2.2.14 Real time-qPCR体系及其反应条件 | 第37页 |
| 2.2.15 转基因果蝇的制作 | 第37-44页 |
| 2.2.15.1 构建载体及进行果蝇注射的总体步骤 | 第37-38页 |
| 2.2.15.2 扩增目的条带 | 第38页 |
| 2.2.15.3 PCR产物的纯化 | 第38-39页 |
| 2.2.15.4 末端平滑DNA片段 3′末端加A尾巴 | 第39页 |
| 2.2.15.5 A-Tailing DNA片段与T载体的连接转化 | 第39页 |
| 2.2.15.6 大肠杆菌的转化 | 第39-40页 |
| 2.2.15.7 菌落PCR | 第40页 |
| 2.2.15.8 质粒的提取 | 第40-41页 |
| 2.2.15.9 双酶切 | 第41页 |
| 2.2.15.10 胶回收 | 第41-42页 |
| 2.2.15.11 DNA片段与CaSpeR载体的连接转化 | 第42页 |
| 2.2.15.12 质粒的纯化 | 第42-43页 |
| 2.2.15.13 注射果蝇 | 第43-44页 |
| 2.2.16 Rescue果蝇的制作 | 第44-45页 |
| 2.2.17 果蝇胚胎的收集与冷处理 | 第45页 |
| 2.2.18 Microarray分析 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-56页 |
| 3.1 MBF1的进化分析 | 第46页 |
| 3.2 mbf1基因的表达模式 | 第46-47页 |
| 3.3 过表达品系和拯救型品系的制作 | 第47-49页 |
| 3.3.1 过表达品系的制作 | 第47-49页 |
| 3.3.2 杂交获得拯救型品系 | 第49页 |
| 3.4 荧光定量鉴定mbf1基因对冷胁迫的表达分析 | 第49-50页 |
| 3.5 成活率实验 | 第50页 |
| 3.6 MBF1的组织定位 | 第50-51页 |
| 3.7 Microarray数据分析MBF1的目的基因 | 第51-53页 |
| 3.8 实时荧光定量PCR鉴定MBF1的目的基因 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 5 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
