| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 中英文对照词表 | 第6-10页 |
| 一 引言 | 第10-17页 |
| （一）文献综述 | 第10-16页 |
| 1.MGL的发现及其表达部位 | 第10-11页 |
| 2.MGL的生理功能 | 第11-12页 |
| 2.1 MGL介导免疫应答 | 第11-12页 |
| 2.2 MGL介导免疫耐受 | 第12页 |
| 2.3 MGL参与肿瘤免疫 | 第12页 |
| 3.MGL的配体特异性 | 第12-13页 |
| 4.MGL的结构及其氨基酸序列分析 | 第13-16页 |
| 4.1 GalNAc特异性结合序列——QPD基序 | 第14页 |
| 4.2 hMGL阻断性抗体的结合序列——WVDGTD基序 | 第14页 |
| 4.3 Ca~(2+)结合位点 | 第14-15页 |
| 4.4 mMGL2和RHL-1中参与Gal NAc结合的氨基酸 | 第15-16页 |
| （二）立题依据与研究思路 | 第16-17页 |
| 二 材料与方法 | 第17-30页 |
| （一）实验材料和试剂 | 第17-20页 |
| 1.实验材料 | 第17-19页 |
| 1.1 细胞 | 第17页 |
| 1.2 质粒 | 第17-18页 |
| 1.3 感受态 | 第18-19页 |
| 2.抗体和主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.1 抗体 | 第19页 |
| 2.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| （二）主要实验仪器 | 第20页 |
| （三）实验方法 | 第20-30页 |
| 1.重组质粒的构建 | 第20-24页 |
| 1.1 PCR及其产物回收 | 第20-22页 |
| 1.2 双酶切及其产物回收 | 第22-23页 |
| 1.3 连接及转化 | 第23页 |
| 1.4 验证及测序 | 第23-24页 |
| 2.慢病毒包装及侵染 | 第24-25页 |
| 2.1 慢病毒包装 | 第24页 |
| 2.2 病毒原液浓缩 | 第24页 |
| 2.3 病毒侵染 | 第24-25页 |
| 3.流式细胞术 | 第25页 |
| 4.RT-PCR及Real-time PCR | 第25-26页 |
| 4.1 RNA提取 | 第25页 |
| 4.2 逆转录（RT-PCR） | 第25-26页 |
| 4.3 实时定量PCR（Real-time PCR） | 第26页 |
| 5.免疫印迹（Western Blot） | 第26-27页 |
| 5.1 蛋白样品制备 | 第26-27页 |
| 5.2 Western Blot | 第27页 |
| 6.免疫荧光 | 第27页 |
| 7.原核蛋白表达纯化 | 第27-28页 |
| 7.1 实验准备 | 第27-28页 |
| 7.2 蛋白诱导表达及纯化 | 第28页 |
| 8.生物膜干涉（BLI） | 第28-29页 |
| 9.图片采集及数据分析 | 第29-30页 |
| 三 实验结果 | 第30-51页 |
| （一）hMGL与α-GalNAc结合实验体系的建立 | 第30-33页 |
| 1.生物膜干涉检测hMGL与α-GalNAc结合实验体系的建立 | 第30-31页 |
| 2.流式细胞术检测hMGL与α-GalNAc结合实验体系的建立 | 第31-33页 |
| 2.1 CHO-MGL稳转细胞系的构建 | 第31-32页 |
| 2.2 CHO-MGL细胞可以与α-GalNAc结合 | 第32-33页 |
| （二） hMGL截短突变体与α-GalNAc的结合 | 第33-38页 |
| 1.hMGL截短突变体稳转细胞系的构建 | 第34-37页 |
| 1.1 hMGL截短突变体质粒的构建 | 第34-36页 |
| 1.2 hMGL截短突变体稳转细胞系的构建 | 第36-37页 |
| 2.生物膜干涉检测hMGL截短突变体蛋白与α-GalNAc的结合 | 第37-38页 |
| 3.流式细胞术检测表达hMGL截短突变体的细胞与α-GalNAc的结合 | 第38页 |
| （三）hMGL单点突变体与α-GalNAc的结合 | 第38-51页 |
| 1.hMGL单点突变体稳转细胞系的构建 | 第39-44页 |
| 1.1 hMGL单点突变体质粒的构建 | 第40-43页 |
| 1.2 hMGL单点突变体稳转细胞系的构建 | 第43-44页 |
| 2.生物膜干涉检测hMGL单点突变体蛋白与α-GalNAc的结合 | 第44-47页 |
| 2.1 Ca~(2+)结合位点对hMGL与α-GalNAc结合的影响 | 第44-45页 |
| 2.2 与mMGL2和RHL-1中重要位点对应的氨基酸对hMGL与α-Gal NAc结合的影响 | 第45-46页 |
| 2.3 WVDGTD基序对hMGL与α-GalNAc结合的影响 | 第46-47页 |
| 3.流式细胞术检测表达hMGL突变体的细胞与α-GalNAc的结合 | 第47-51页 |
| 3.1 Ca~(2+)结合位点对hMGL与α-GalNAc结合的影响 | 第47-48页 |
| 3.2 与mMGL2和RHL-1中重要位点对应的氨基酸对hMGL与α-GalNAc结合的影响 | 第48-49页 |
| 3.3 WVDGTD基序对hMGL与α-GalNAc结合的影响 | 第49-51页 |
| 四 讨论 | 第51-56页 |
| （一）参与hMGL与α-GalNAc结合的9个重要氨基酸位点在空间结构上的相互作用 | 第52-53页 |
| （二）Ca~(2+)结合位点在不同凝集素分子中的保守性 | 第53-54页 |
| （三）生物膜干涉与流式细胞术两种实验方法的比较 | 第54-56页 |
| 五 总结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
