| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第15-37页 |
| 1.1 应激 | 第15-25页 |
| 1.1.1 应激的概念 | 第15页 |
| 1.1.2 应激与HPA轴 | 第15-17页 |
| 1.1.3 应激对雌性生殖的影响 | 第17-21页 |
| 1.1.3.1 应激与生殖内分泌 | 第17-19页 |
| 1.1.3.2 应激与胚胎发育 | 第19-21页 |
| 1.1.4 CRH与雌性生殖 | 第21-23页 |
| 1.1.4.1 CRH分布及其结构特征 | 第21页 |
| 1.1.4.2 CRH生理功能 | 第21-23页 |
| 1.1.5 糖皮质激素与雌性生殖 | 第23-25页 |
| 1.1.5.1 糖皮质激素特性及其生理功能 | 第23-25页 |
| 1.1.5.2 糖皮质激素对HPA轴的负反馈 | 第25页 |
| 1.2 氧化应激与雌性生殖 | 第25-30页 |
| 1.2.1 氧化应激的概念 | 第25-26页 |
| 1.2.2 氧化应激的生理机制 | 第26-28页 |
| 1.2.3 氧化应激对雌性生殖的影响 | 第28-30页 |
| 1.2.3.1 氧化应激对排卵的影响 | 第28-29页 |
| 1.2.3.2 氧化应激对卵母细胞非整倍性的影响 | 第29页 |
| 1.2.3.3 氧化应激对早期胚胎发育的影响 | 第29-30页 |
| 1.2.3.4 氧化应激与雌性动物衰老 | 第30页 |
| 1.3 细胞凋亡与信号通路 | 第30-36页 |
| 1.3.1 Fas/FasL信号传导系统 | 第31-34页 |
| 1.3.1.1 Fas和FasL的结构 | 第31-33页 |
| 1.3.1.2 Fas/FasL凋亡信号通路 | 第33-34页 |
| 1.3.2 Caspase激活、功能与调控 | 第34-36页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第36-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-39页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第37页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第37-38页 |
| 2.1.3 主要试剂及配置 | 第38-39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-46页 |
| 2.2.1 小鼠OECs培养 | 第39页 |
| 2.2.2 母鼠超排与原核胚收集 | 第39-40页 |
| 2.2.3 胚胎体外培养 | 第40页 |
| 2.2.3.1 单纯CZB培养 | 第40页 |
| 2.2.3.2 与OECs共培养 | 第40页 |
| 2.2.3.3 CM培养 | 第40页 |
| 2.2.4 OECs氧化应激指标检测 | 第40-41页 |
| 2.2.4.1 TOS、TAS及OSI检测 | 第40-41页 |
| 2.2.4.2 过氧化物酶活性检测 | 第41页 |
| 2.2.4.4 GSH与GSSG水平检测 | 第41页 |
| 2.2.5 OECs分泌生长因子检测 | 第41-42页 |
| 2.2.6 OECs凋亡指标检测 | 第42页 |
| 2.2.6.1 sFasL的检测 | 第42页 |
| 2.2.6.2 OECs凋亡检测 | 第42页 |
| 2.2.7 Western Blot | 第42-44页 |
| 2.2.7.1 OECs蛋白样品准备 | 第42页 |
| 2.2.7.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第42-43页 |
| 2.2.7.3 抗原抗体的结合及显色 | 第43-44页 |
| 2.2.8 免疫荧光染色 | 第44-45页 |
| 2.2.9 早期胚胎中 11-HSD1和 11-HSD2的检测 | 第45-46页 |
| 2.2.9.1 总RNA的提取 | 第45页 |
| 2.2.9.2 cDNA的生成 | 第45页 |
| 2.2.9.3 荧光定量PCR | 第45-46页 |
| 2.3 数据统计 | 第46-47页 |
| 3 结果 | 第47-63页 |
| 3.1 小鼠OECs体外培养体系建立 | 第47页 |
| 3.2 CRH对小鼠着床前胚胎体外发育的影响 | 第47-54页 |
| 3.2.1 体外添加CRH对小鼠原核胚体外发育的影响 | 第47-48页 |
| 3.2.2 共培养中CRH对小鼠原核胚体外发育的影响 | 第48-49页 |
| 3.2.3 条件化培养液对小鼠原核胚体外发育的影响 | 第49页 |
| 3.2.4 早期胚胎与OECs中CRHR表达 | 第49-50页 |
| 3.2.5 CRH对OECs氧化应激的影响 | 第50-51页 |
| 3.2.6 CRH对OECs凋亡的影响 | 第51-53页 |
| 3.2.6.1 Fas/FasL在小鼠OECs表达和分泌 | 第51-52页 |
| 3.2.6.2 Caspase-3 在小鼠OECs表达 | 第52页 |
| 3.2.6.3 凋亡检测 | 第52-53页 |
| 3.2.7 CRH对OECs分泌生长因子的影响 | 第53页 |
| 3.2.8 胚胎中Fas、Caspase-3 表达 | 第53-54页 |
| 3.3 GCs对小鼠原核胚体外发育的影响 | 第54-61页 |
| 3.3.1 体外添加GCs对小鼠原核胚体外发育的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.2 共培养中GCs对小鼠原核胚体外发育的影响 | 第55页 |
| 3.3.3 条件化培养液对小鼠原核胚体外发育的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.4 早期胚胎与OECs中GR表达 | 第56-57页 |
| 3.3.5 Cort对OECs氧化应激的影响 | 第57-58页 |
| 3.3.6 Cort对OECs凋亡的影响 | 第58-60页 |
| 3.3.6.1 Fas/FasL在小鼠OECs表达和分泌 | 第58-59页 |
| 3.3.6.2 Caspase-3 在小鼠OECs表达 | 第59页 |
| 3.3.6.3 凋亡检测 | 第59-60页 |
| 3.3.7 Cort对OECs分泌生长因子的影响 | 第60页 |
| 3.3.8 胚胎中Fas、Caspase-3 表达 | 第60-61页 |
| 3.4 gld小鼠验证 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-72页 |
| 4.1 小鼠OECs培养体系建立 | 第63-64页 |
| 4.2 CRH对早期胚胎发育的影响 | 第64-65页 |
| 4.3 GCs对早期胚胎发育的影响 | 第65-67页 |
| 4.4 氧化应激降低胚胎发育水平 | 第67-69页 |
| 4.4.1 氧化应激作用机制 | 第67-68页 |
| 4.4.2 生长因子与氧化应激 | 第68-69页 |
| 4.5 细胞凋亡降低胚胎发育水平 | 第69-72页 |
| 4.5.1 CRH或GCs在细胞凋亡中的作用 | 第69-70页 |
| 4.5.2 ROS在Fas信号传导中的作用 | 第70-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| Publication List | 第87页 |
