| 摘要 | 第7-13页 |
| ABSTRACT | 第13-20页 |
| 缩写词表 | 第21-22页 |
| 第一章 研究背景 | 第22-40页 |
| 1.1 纤维素资源的开发利用 | 第22-23页 |
| 1.2 纤维素的结构 | 第23-24页 |
| 1.3 纤维素的微生物降解 | 第24-30页 |
| 1.3.1 纤维素降解微生物 | 第24-25页 |
| 1.3.2 纤维素降解机制 | 第25-28页 |
| 1.3.3 纤维素结晶区的降解策略 | 第28-30页 |
| 1.4 Ⅸ型分泌系统 | 第30-31页 |
| 1.5 Cytophaga hutchinsonii研究背景 | 第31-38页 |
| 1.5.1 C.hutchinsonii的系统发育 | 第31-32页 |
| 1.5.2 C.hutchinsonii的特征 | 第32-34页 |
| 1.5.3 C.hutchinsonii的研究进展 | 第34-38页 |
| 1.7 论文的立题和工作思路 | 第38-40页 |
| 第二章 基于FLP/FRT重组系统的外源DNA插入整合技术的建立 | 第40-50页 |
| 2.1 材料与方法 | 第41-45页 |
| 2.1.1 菌种及质粒 | 第41页 |
| 2.1.2 实验中用到的引物 | 第41-42页 |
| 2.1.3 主要试剂及仪器 | 第42-43页 |
| 2.1.4 培养条件 | 第43页 |
| 2.1.5 分子生物学常用反应体系及操作 | 第43-44页 |
| 2.1.6 E.coli感受态的制备与转化 | 第44页 |
| 2.1.7 C.hutchinsonii感受态的制备与转化 | 第44-45页 |
| 2.2 实验结果 | 第45-48页 |
| 2.2.1 含单个FRT位点C.hutchinsonii出发菌株的构建 | 第45-47页 |
| 2.2.2 基于FLP/FRT重组系统的基因组插入整合质粒的构建 | 第47页 |
| 2.2.3 外源基因基于FLP/FRT重组系统的表达实例 | 第47-48页 |
| 2.3 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 chu_3220基因功能研究 | 第50-87页 |
| 3.1 材料和方法 | 第50-70页 |
| 3.1.1 菌种及质粒 | 第50-51页 |
| 3.1.2 实验中用到的引物 | 第51-53页 |
| 3.1.3 主要试剂及仪器 | 第53-54页 |
| 3.1.4 培养条件 | 第54-55页 |
| 3.1.5 插入突变筛选纤维素降解缺陷株 | 第55页 |
| 3.1.6 滤纸降解实验 | 第55页 |
| 3.1.7 基因敲除 | 第55-57页 |
| 3.1.8 再生无定形纤维素(RAC)的制备 | 第57页 |
| 3.1.9 生长曲线测定 | 第57页 |
| 3.1.10 RT-PCR | 第57-60页 |
| 3.1.11 RT-qPCR | 第60-61页 |
| 3.1.12 XRD测定纤维素结晶度 | 第61-62页 |
| 3.1.13 纤维素底物利用效率测定 | 第62页 |
| 3.1.14 扫描电子显微镜(SEM)检测纤维素表面形态 | 第62页 |
| 3.1.15 蛋白表达与纯化 | 第62-65页 |
| 3.1.16 纤维素结合实验 | 第65-66页 |
| 3.1.17 蛋白定位 | 第66-67页 |
| 3.1.18 纤维素酶活测定 | 第67-68页 |
| 3.1.19 菌体对纤维素吸附效率测定 | 第68页 |
| 3.1.20 离子色谱测定纤维素降解产物 | 第68-69页 |
| 3.1.21 基因表达水平测定 | 第69-70页 |
| 3.1.22 纤维素内切酶酶活的复性电泳 | 第70页 |
| 3.2 结果 | 第70-83页 |
| 3.2.1 转座子插入突变获得滤纸降解缺陷株 | 第70-72页 |
| 3.2.2 生物信息学分析 | 第72-73页 |
| 3.2.3 chu_3220是纤维素结晶区降解必需基因 | 第73-76页 |
| 3.2.4 CHU_3220是纤维素结合蛋白 | 第76-77页 |
| 3.2.5 CHU_3220的亚细胞定位 | 第77-78页 |
| 3.2.6 chu_3220在不同碳源中的表达水平变化 | 第78-79页 |
| 3.2.7 chu_3220对纤维素酶的影响 | 第79-81页 |
| 3.2.8 chu_3220对纤维素水解产物的影响 | 第81-83页 |
| 3.2.9 影响纤维素结晶区降解的其他因素 | 第83页 |
| 3.3 讨论 | 第83-87页 |
| 第四章 chu_1557基因功能研究 | 第87-111页 |
| 4.1 材料和方法 | 第87-94页 |
| 4.1.1 菌种及质粒 | 第87-88页 |
| 4.1.2 实验中用到的引物 | 第88-89页 |
| 4.1.3 主要试剂及仪器 | 第89-90页 |
| 4.1.4 培养条件 | 第90-91页 |
| 4.1.5 转座子插入突变筛选纤维素降解缺陷株 | 第91页 |
| 4.1.6 滤纸降解实验 | 第91页 |
| 4.1.7 生长曲线测定、基因敲除和XRD测定纤维素结晶度 | 第91页 |
| 4.1.8 基因表达水平检测 | 第91-92页 |
| 4.1.9 葡萄糖吸收实验 | 第92页 |
| 4.1.10 胞内ATP测定 | 第92-93页 |
| 4.1.11 RT-PCR、RT-qPCR、蛋白定位、纤维素内切酶酶活测定 | 第93页 |
| 4.1.12 纤维素吸附蛋白的制备 | 第93-94页 |
| 4.2 结果 | 第94-108页 |
| 4.2.1 转座子插入突变获得滤纸降解缺陷株 | 第94-95页 |
| 4.2.2 chu_1557表达水平检测 | 第95-96页 |
| 4.2.3 chu_1557影响纤维素结晶区降解 | 第96-98页 |
| 4.2.4 XRD测定纤维素的结晶度 | 第98页 |
| 4.2.5 chu_1557与葡萄糖的吸收相关 | 第98-99页 |
| 4.2.6 低浓度葡萄糖预培养能够回复突变株纤维素降解的能力 | 第99页 |
| 4.2.7 添加葡萄糖能够回复突变株降解纤维素的能力 | 第99-100页 |
| 4.2.8 chu_1557的缺失影响了胞内ATP水平 | 第100-102页 |
| 4.2.9 CHU_1557的亚细胞定位 | 第102-103页 |
| 4.2.10 CHU_1557是纤维素结合蛋白 | 第103-104页 |
| 4.2.11 chu_1557对纤维素酶的影响 | 第104-106页 |
| 4.2.12 chu_1557的缺失对外膜蛋白的影响 | 第106-108页 |
| 4.3 讨论 | 第108-111页 |
| 全文总结及展望 | 第111-115页 |
| 参考文献 | 第115-124页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第126页 |
