| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 综述与导言 | 第10-21页 |
| ·水产养殖的现状 | 第10页 |
| ·迟钝爱德华氏菌介绍 | 第10-12页 |
| ·迟钝爱德华氏菌 | 第10-11页 |
| ·迟钝爱德华氏菌是目前具有极大危害的海水养殖水生动物致病菌 | 第11页 |
| ·迟钝爱德华氏菌致病机理的研究现状 | 第11-12页 |
| ·迟钝爱德华氏菌的耐药性 | 第12页 |
| ·减毒疫苗是防范海水养殖型生物病原菌侵染的最佳工具 | 第12-13页 |
| ·σ因子概述 | 第13-17页 |
| ·σ因子控制与DNA的结合 | 第13页 |
| ·RpoN是Sigma(54)家族的唯一成员 | 第13-16页 |
| ·RpoN在氮源调控、压力调控及毒力调控方面具有重要作用 | 第16-17页 |
| ·相关实验技术综述 | 第17-19页 |
| ·自杀质粒系统 | 第17-18页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第18页 |
| ·差异显示PCR技术 | 第18-19页 |
| ·课题研究背景及工作目标 | 第19-21页 |
| ·研究背景 | 第19-20页 |
| ·工作目标 | 第20-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-40页 |
| ·材料与仪器 | 第21-29页 |
| ·化学药品与试剂 | 第21页 |
| ·生物药品与试剂 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·缓冲液 | 第22-24页 |
| ·实验仪器设备 | 第24-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第25-26页 |
| ·引物 | 第26-28页 |
| ·生物学软件 | 第28-29页 |
| ·微生物学方法 | 第29页 |
| ·细菌培养条件 | 第29页 |
| ·菌种的保藏 | 第29页 |
| ·遗传学方法 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第29页 |
| ·迟钝爱德华氏菌电转感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌的转化(钙转) | 第30页 |
| ·迟钝爱德华氏菌的电转化 | 第30页 |
| ·分子生物学方法(DNA相关) | 第30-35页 |
| ·质粒DNA提取 | 第30-31页 |
| ·染色体DNA的大量抽提 | 第31-32页 |
| ·DNA的酶切 | 第32页 |
| ·DNA的连接 | 第32页 |
| ·DNA的乙醇沉淀 | 第32页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶回收 | 第33-34页 |
| ·Sourthern blot | 第34-35页 |
| ·分子生物学方法(RNA相关) | 第35-40页 |
| ·迟钝爱德华氏菌RNA提取 | 第35-37页 |
| ·RNA质量检测 | 第37页 |
| ·逆转录PCR | 第37-38页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第38-39页 |
| ·差异显示PCR | 第39页 |
| ·银染 | 第39-40页 |
| 第3章 结果与分析 | 第40-68页 |
| ·rpoN序列及功能区域分析 | 第40-42页 |
| ·rpoN敲除株、过表达株及回补株构建 | 第42-48页 |
| ·自杀质粒系统构建rpoN敲除株 | 第42-47页 |
| ·RpoN过表达株及回补株构建 | 第47-48页 |
| ·实时荧光定量PCR考察rpoN在生长周期中规律变化 | 第48-53页 |
| ·迟钝爱德华氏菌生长曲线测定及菌体收集 | 第48页 |
| ·细胞总RNA提取 | 第48-49页 |
| ·RNA样品中基因组DNA的成功去除 | 第49-50页 |
| ·逆转录PCR验证基因组DNA去除 | 第50-51页 |
| ·实时荧光定量PCR比较各时期rpoN表达量 | 第51-53页 |
| ·rpoN框内部分缺失株未对上下游基因造成影响 | 第53-55页 |
| ·逆转录PCR考察rpoN部分缺失株未对其上下游基因造成影响 | 第53-54页 |
| ·实时荧光定量PCR考察rpoN部分缺失株未对其上下游基因造成影响 | 第54页 |
| ·rpoN及其上下游基因共转录 | 第54-55页 |
| ·RpoN对Sigma(70)家族成员在转录水平上的调控 | 第55-57页 |
| ·RpoN在细菌生长方面发挥重要作用 | 第57-58页 |
| ·迟钝爱德华氏菌rpoN框内部分缺失株生长曲线测定 | 第57-58页 |
| ·迟钝爱德华氏菌rpoN框内部分缺失株P_Ⅱ protein编码基因考察 | 第58页 |
| ·RpoN是重要的压力调控因子 | 第58-60页 |
| ·RpoN在氧化应激能力调控方面发挥重要作用 | 第58页 |
| ·RpoN与饥饿耐受能力相关 | 第58-59页 |
| ·RpoN与高渗耐受相关 | 第59页 |
| ·RpoN与酸耐受性相关 | 第59-60页 |
| ·RpoN与毒力相关 | 第60-64页 |
| ·rpoN缺失株提高了对模式生物斑马鱼的半数致死量及感染周期 | 第60-62页 |
| ·RpoN与生物被膜形成相关 | 第62页 |
| ·RpoN与硫酸软骨素酶活性相关 | 第62-63页 |
| ·RpoN与多粘菌素B抗性无相关性 | 第63-64页 |
| ·差异显示PCR筛选差异基因 | 第64-65页 |
| ·差异显示PCR技术 | 第64页 |
| ·实时荧光定量PCR验证疑似差异基因 | 第64-65页 |
| ·RpoN与鞭毛合成相关 | 第65-66页 |
| ·实时荧光定量PCR考察flhABCDE转录表达水平 | 第65-66页 |
| ·RpoN与鞭毛运动性相关 | 第66页 |
| ·RpoN调控启动子区域的Sequence logos | 第66-68页 |
| 第4章 讨论 | 第68-70页 |
| 第5章 结论及展望 | 第70-72页 |
| ·主要结论 | 第70页 |
| ·展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 攻读硕士学位期间撰写的论文 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
