重组羧肽酶B研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 研究背景 | 第10-24页 |
| ·羧肽酶B简介 | 第10-13页 |
| ·羧肽酶原B的结构 | 第10-11页 |
| ·羧肽酶B的活化 | 第11-12页 |
| ·羧肽酶B的应用 | 第12页 |
| ·羧肽酶B的研究进展 | 第12-13页 |
| ·重组蛋白的原核表达 | 第13-17页 |
| ·稀有密码子影响重组蛋白的合成 | 第13页 |
| ·重组蛋白的分泌 | 第13-14页 |
| ·重组蛋白的二硫键 | 第14-17页 |
| ·蛋白的折叠、聚集与包涵体 | 第17-21页 |
| ·蛋白的折叠 | 第17-18页 |
| ·蛋白的聚集 | 第18页 |
| ·包涵体 | 第18-21页 |
| ·重组蛋白在酵母中的表达 | 第21-23页 |
| ·重组蛋白的翻译后修饰 | 第21-22页 |
| ·重组蛋白的稳定性 | 第22-23页 |
| ·本课题研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第24-31页 |
| ·实验材料和设备 | 第24-26页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·培养基的配置 | 第25页 |
| ·常用试剂的配置 | 第25-26页 |
| ·实验设备 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-31页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·沉淀与浓缩分泌到胞外的蛋白 | 第27页 |
| ·大肠杆菌质粒的转化 | 第27-28页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第28页 |
| ·测定蛋白含量-Bradford法 | 第28-29页 |
| ·羧肽酶B的测活方法 | 第29-31页 |
| 第3章 重组猪羧肽酶原B菌株的构建 | 第31-38页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-33页 |
| ·基因设计与合成 | 第31页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第31-32页 |
| ·双酶切PCR产物和质粒pET-28a | 第32页 |
| ·构建表达载体 | 第32页 |
| ·转化 | 第32页 |
| ·表达鉴定 | 第32-33页 |
| ·蛋白表达形式的鉴定 | 第33页 |
| ·包涵体洗涤 | 第33页 |
| ·包涵体的变、复性与酶解 | 第33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-37页 |
| ·PCR扩增结果 | 第33-34页 |
| ·双酶切PCR产物和质粒pET-28a | 第34-35页 |
| ·表达鉴定 | 第35-36页 |
| ·破碎菌体鉴定表达形式 | 第36页 |
| ·包涵体的变、复性与酶解 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 第4章 重组猪羧肽酶B的纯化与性质研究 | 第38-46页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-39页 |
| ·重组猪羧肽酶B的纯化 | 第38页 |
| ·跑蛋白电泳鉴定目的蛋白纯度 | 第38页 |
| ·猪羧肽酶B性质研究 | 第38-39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-44页 |
| ·重组猪源羧肽酶B的纯化 | 第39-40页 |
| ·纯化结果分析 | 第40页 |
| ·重组猪羧肽酶B性质研究 | 第40-44页 |
| ·本章小结 | 第44-46页 |
| 第5章 重组人羧肽酶原B毕赤酵母的构建与分泌表达 | 第46-55页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-49页 |
| ·重组质粒的构建与扩增 | 第46-48页 |
| ·重组质粒转入酵母细胞 | 第48-49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-54页 |
| ·重组质粒的构建与扩增 | 第49-52页 |
| ·重组质粒转入酵母细胞 | 第52-54页 |
| ·本章小结 | 第54-55页 |
| 第6章 重组猪羧肽酶原B菌株的高密度发酵 | 第55-59页 |
| ·引言 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-56页 |
| ·种子培养 | 第55页 |
| ·发酵罐培养 | 第55页 |
| ·补料 | 第55页 |
| ·诱导 | 第55-56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-58页 |
| ·重组大肠杆菌的发酵进程 | 第56页 |
| ·重组大肠杆菌的发酵进程曲线 | 第56-57页 |
| ·重组蛋白表达情况 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 第7章 结论与展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
