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家蚕Polycomb家族蛋白基因的克隆表达、功能研究及应用

摘要第1-8页
Abstact第8-10页
第一章 综述第10-20页
   ·Polycomb group的发现第10-11页
   ·PcG蛋白复合体第11-14页
   ·PcG蛋白的转录抑制机制第14-17页
   ·PcG基因的研究第17-20页
第二章 材料和方法第20-40页
   ·实验材料第20页
     ·生物材料第20页
     ·载体及宿主菌第20页
     ·蚕卵解除滞育第20页
   ·实验仪器及设备第20页
   ·实验常用的溶液和试剂第20-24页
     ·培养基的配制第20-21页
     ·抗生素及蓝白斑筛选试剂第21-22页
     ·RNA提取相关试剂第22页
     ·核酸电泳相关试剂第22页
     ·Q-PCR相关试剂第22页
     ·载体构建相关试剂第22页
     ·蛋白表达和纯化相关试剂第22-23页
     ·蛋白提取、SDS-PAGE蛋白电泳试剂第23-24页
     ·蛋白免疫印迹Western blot试剂第24页
   ·常用分子生物学实验方法第24-27页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备方法(CaCl2法)第24-25页
     ·组织总RNA提取方法第25页
     ·组织总蛋白提取方法第25-26页
     ·SDS-PAGE蛋白胶的制备第26页
     ·Western免疫印迹第26-27页
   ·家蚕PcG家族蛋白相关基因的克隆表达及载体构建第27-31页
     ·PcG克隆引物设计与合成第27页
     ·总RNA提取及第一条链cDNA的合成第27-29页
     ·PCR扩增目的片段及纯化第29-30页
     ·目的片段与载体连接进行蓝白斑筛选第30页
     ·双酶切鉴定及测序验证第30页
     ·目的片段与同样双酶切的表达载体p GEX-6p1连接第30-31页
     ·表达载体的构建和鉴定第31页
   ·重组表达载体蛋白的表达和纯化第31-33页
     ·重组蛋白的表达第31-32页
     ·重组蛋白的纯化第32-33页
     ·多克隆抗体的制备第33页
   ·PcG家族相关基因的表达分析第33-35页
     ·Q-PCR分析PcG家族相关基因的表达谱第33-35页
     ·Western bolt检测PcG家族相关蛋白的表达特征第35页
   ·RNA干涉家蚕蛹期实验第35-40页
     ·PC、PSC dsRNA干涉相关引物序列第35-36页
     ·RNA干涉家蚕雌蛹第36-39页
     ·Q-PCR检测RNA干涉后蚕卵中PC、PSC的表达特性第39-40页
第三章 结果与分析第40-56页
   ·PcG家族相关基因克隆与表达载体构建第40-43页
     ·PcG家族相关基因克隆第40页
     ·PcG家族相关基因表达载体的构建第40-43页
   ·PcG家族蛋白的表达和纯化第43-48页
     ·PcG家族蛋白的原核表达第43-45页
     ·PcG家族蛋白的纯化第45-47页
     ·PcG家族蛋白多克隆抗体的检测第47-48页
   ·PcG家族相关基因在家蚕不同发育时期和不同组织的表达特性第48-53页
     ·PcG家族相关基因在不同发育时期蚕卵中的表达特性第48-51页
     ·PcG家族相关基因在家蚕幼虫中的表达特性第51页
     ·PcG相关基因在家蚕蛹期的表达特性第51-53页
   ·Western免疫印迹检测家蚕不同发育时期和不同组织中PcG家族蛋白的表达特性第53页
   ·PC、PSC ds RNA干涉家蚕蛹期蚕卵实验第53-56页
     ·RNA干涉家蚕雌蛹第53-54页
     ·Q-PCR检测RNA干涉后蚕卵中PC、PSC的表达特性第54-56页
第四章 讨论第56-60页
   ·PcG家族相关基因的克隆及表达载体构建第56页
   ·PcG家族相关蛋白的表达和纯化第56-57页
   ·PcG家族相关蛋白多克隆抗体的制备第57页
   ·PcG家族相关基因的表达特性第57-58页
   ·RNA干涉家蚕雌蛹第58-60页
参考文献第60-65页
附录第65-69页
 附录A:质粒图谱第65-68页
 附录B:攻读学位期间取得的科研成果第68-69页
致谢第69页

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