摘要 | 第1-8页 |
Abstact | 第8-10页 |
第一章 综述 | 第10-20页 |
·Polycomb group的发现 | 第10-11页 |
·PcG蛋白复合体 | 第11-14页 |
·PcG蛋白的转录抑制机制 | 第14-17页 |
·PcG基因的研究 | 第17-20页 |
第二章 材料和方法 | 第20-40页 |
·实验材料 | 第20页 |
·生物材料 | 第20页 |
·载体及宿主菌 | 第20页 |
·蚕卵解除滞育 | 第20页 |
·实验仪器及设备 | 第20页 |
·实验常用的溶液和试剂 | 第20-24页 |
·培养基的配制 | 第20-21页 |
·抗生素及蓝白斑筛选试剂 | 第21-22页 |
·RNA提取相关试剂 | 第22页 |
·核酸电泳相关试剂 | 第22页 |
·Q-PCR相关试剂 | 第22页 |
·载体构建相关试剂 | 第22页 |
·蛋白表达和纯化相关试剂 | 第22-23页 |
·蛋白提取、SDS-PAGE蛋白电泳试剂 | 第23-24页 |
·蛋白免疫印迹Western blot试剂 | 第24页 |
·常用分子生物学实验方法 | 第24-27页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备方法(CaCl2法) | 第24-25页 |
·组织总RNA提取方法 | 第25页 |
·组织总蛋白提取方法 | 第25-26页 |
·SDS-PAGE蛋白胶的制备 | 第26页 |
·Western免疫印迹 | 第26-27页 |
·家蚕PcG家族蛋白相关基因的克隆表达及载体构建 | 第27-31页 |
·PcG克隆引物设计与合成 | 第27页 |
·总RNA提取及第一条链cDNA的合成 | 第27-29页 |
·PCR扩增目的片段及纯化 | 第29-30页 |
·目的片段与载体连接进行蓝白斑筛选 | 第30页 |
·双酶切鉴定及测序验证 | 第30页 |
·目的片段与同样双酶切的表达载体p GEX-6p1连接 | 第30-31页 |
·表达载体的构建和鉴定 | 第31页 |
·重组表达载体蛋白的表达和纯化 | 第31-33页 |
·重组蛋白的表达 | 第31-32页 |
·重组蛋白的纯化 | 第32-33页 |
·多克隆抗体的制备 | 第33页 |
·PcG家族相关基因的表达分析 | 第33-35页 |
·Q-PCR分析PcG家族相关基因的表达谱 | 第33-35页 |
·Western bolt检测PcG家族相关蛋白的表达特征 | 第35页 |
·RNA干涉家蚕蛹期实验 | 第35-40页 |
·PC、PSC dsRNA干涉相关引物序列 | 第35-36页 |
·RNA干涉家蚕雌蛹 | 第36-39页 |
·Q-PCR检测RNA干涉后蚕卵中PC、PSC的表达特性 | 第39-40页 |
第三章 结果与分析 | 第40-56页 |
·PcG家族相关基因克隆与表达载体构建 | 第40-43页 |
·PcG家族相关基因克隆 | 第40页 |
·PcG家族相关基因表达载体的构建 | 第40-43页 |
·PcG家族蛋白的表达和纯化 | 第43-48页 |
·PcG家族蛋白的原核表达 | 第43-45页 |
·PcG家族蛋白的纯化 | 第45-47页 |
·PcG家族蛋白多克隆抗体的检测 | 第47-48页 |
·PcG家族相关基因在家蚕不同发育时期和不同组织的表达特性 | 第48-53页 |
·PcG家族相关基因在不同发育时期蚕卵中的表达特性 | 第48-51页 |
·PcG家族相关基因在家蚕幼虫中的表达特性 | 第51页 |
·PcG相关基因在家蚕蛹期的表达特性 | 第51-53页 |
·Western免疫印迹检测家蚕不同发育时期和不同组织中PcG家族蛋白的表达特性 | 第53页 |
·PC、PSC ds RNA干涉家蚕蛹期蚕卵实验 | 第53-56页 |
·RNA干涉家蚕雌蛹 | 第53-54页 |
·Q-PCR检测RNA干涉后蚕卵中PC、PSC的表达特性 | 第54-56页 |
第四章 讨论 | 第56-60页 |
·PcG家族相关基因的克隆及表达载体构建 | 第56页 |
·PcG家族相关蛋白的表达和纯化 | 第56-57页 |
·PcG家族相关蛋白多克隆抗体的制备 | 第57页 |
·PcG家族相关基因的表达特性 | 第57-58页 |
·RNA干涉家蚕雌蛹 | 第58-60页 |
参考文献 | 第60-65页 |
附录 | 第65-69页 |
附录A:质粒图谱 | 第65-68页 |
附录B:攻读学位期间取得的科研成果 | 第68-69页 |
致谢 | 第69页 |