| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 上篇 文献综述 | 第9-22页 |
| 第一章 番木瓜畸形花叶病毒研究进展 | 第9-13页 |
| 1 番木瓜简介 | 第9页 |
| 2 番木瓜畸形花叶病毒 | 第9-13页 |
| ·PLDMV概述 | 第9-10页 |
| ·PLDMV的寄主范围、症状表现及传播途径 | 第10-11页 |
| ·PLDMV的基因组结构与功能 | 第11-13页 |
| 第二章 RNA沉默在植物抗病育种中的应用 | 第13-21页 |
| 1 RNA沉默的发现 | 第13-14页 |
| 2 RNA沉默的基本作用机制 | 第14-15页 |
| 3 植物抗病育种中RNA沉默的诱发途径 | 第15-18页 |
| ·正义或反义病毒序列介导的抗性 | 第15-16页 |
| ·源自于病毒的hpRNA介导的抗性 | 第16-17页 |
| ·人工microRNA介导的抗性 | 第17页 |
| ·瞬时性的RNA沉默介导的抗性 | 第17-18页 |
| 4 RNA沉默在抗不同病原体中的应用 | 第18-21页 |
| ·RNA沉默介导的RNA病毒、DNA病毒和类病毒抗性 | 第18-19页 |
| ·RNA沉默介导的抗植物真菌病原体抗性 | 第19-20页 |
| ·RNA沉默介导的抗植物线虫与昆虫抗性 | 第20-21页 |
| 第三章 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 下篇 研究内容 | 第22-51页 |
| 第一章 试验材料、主要试剂与仪器设备 | 第22-25页 |
| 1 供试材料与病毒 | 第22页 |
| 2 菌株 | 第22页 |
| 3 载体及图谱 | 第22-23页 |
| 4 仪器设备 | 第23-24页 |
| 5 主要试剂 | 第24-25页 |
| 第二章 试验方法 | 第25-38页 |
| 1 目的片段的选择 | 第25页 |
| 2 dsRNA原核表达载体的构建 | 第25-32页 |
| ·引物设计 | 第25-26页 |
| ·PLDMV CP基因的克隆 | 第26-27页 |
| ·含有pdk内含子的ihpRNA结构的构建 | 第27-28页 |
| ·ihpRNA结构的酶切鉴定 | 第28-31页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第31页 |
| ·原核表达载体的鉴定 | 第31-32页 |
| 3 dsRNA原核表达体系的构建 | 第32-33页 |
| ·质粒的提取 | 第32页 |
| ·RNaseⅢ缺陷型大肠杆菌感受态的制备 | 第32页 |
| ·转化 | 第32页 |
| ·重组菌株的鉴定 | 第32-33页 |
| 4 dsRNA的诱导表达 | 第33-34页 |
| ·诱导条件 | 第33页 |
| ·Trizol法小量提取dsRN | 第33页 |
| ·dsRNA的鉴定 | 第33-34页 |
| 5 dsRNA抗番木瓜畸形花叶病毒的研究 | 第34-38页 |
| ·dsRNA粗提液的制备 | 第34-35页 |
| ·PLDMV的接种方法 | 第35页 |
| ·使用dsRNA粗提液处理番木瓜植株 | 第35-36页 |
| ·ELISA分析 | 第36-38页 |
| 第三章 结果与分析 | 第38-47页 |
| 1 PLDMV-CP基因的克隆 | 第38页 |
| 2 重组pRNAi-LIC载体的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 3 dsRNA原核表达载体的鉴定 | 第39-40页 |
| 4 dsRNA原核表达体系的构建 | 第40-41页 |
| 5 dsRNA的诱导表达 | 第41-42页 |
| 6 dsRNA的鉴定 | 第42-43页 |
| 7 不同长度的dsRNA的抗病效果 | 第43-47页 |
| ·保护性处理的抗病效果 | 第43-45页 |
| ·治疗性处理的抗病效果 | 第45-47页 |
| 第四章 讨论 | 第47-50页 |
| 1 目的基因的选择 | 第47页 |
| 2 ihpRNA结构的构建 | 第47-48页 |
| 3 dsRNA原核表达菌株的选择 | 第48页 |
| 4 原核表达的dsRNA介导的植物病毒抗性 | 第48-50页 |
| 第五章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |