| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 1 绪论 | 第13-23页 |
| ·γ-氨基丁酸的概述 | 第13-19页 |
| ·γ-氨基丁酸的基本性质 | 第13页 |
| ·γ-氨基丁酸的分布 | 第13页 |
| ·γ-氨基丁酸的代谢 | 第13-15页 |
| ·γ-氨基丁酸的生理功能 | 第15-17页 |
| ·γ-氨基丁酸的开发应用 | 第17-18页 |
| ·γ-氨基丁酸的合成方法 | 第18-19页 |
| ·γ-氨基丁酸的测定方法 | 第19页 |
| ·谷氨酸脱羧酶(GAD)的概述 | 第19-20页 |
| ·GAD的分布及活性调节 | 第19页 |
| ·GAD的克隆及表达 | 第19-20页 |
| ·固定化技术 | 第20-21页 |
| ·国内外研究进展 | 第21页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第21页 |
| ·本课题的来源及主要研究内容 | 第21-23页 |
| ·课题来源 | 第21-22页 |
| ·本课题主要的研究内容 | 第22-23页 |
| 2 产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选及诱变育种 | 第23-33页 |
| ·实验材料与仪器 | 第23-24页 |
| ·菌种来源 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·仪器与设备 | 第24页 |
| ·试验方法 | 第24-26页 |
| ·菌种的分离纯化 | 第24页 |
| ·γ-氨基丁酸的定性测定 | 第24-25页 |
| ·菌株形态学及生理生化鉴定 | 第25页 |
| ·植物乳杆菌的菌种活化 | 第25页 |
| ·细胞转化液中γ-氨基丁酸的定量测定 | 第25页 |
| ·菌株的诱变与筛选 | 第25-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-32页 |
| ·菌种的分离纯化 | 第26页 |
| ·γ-氨基丁酸的定性测定 | 第26-27页 |
| ·菌株形态学及生理生化鉴定 | 第27-28页 |
| ·菌株生长曲线的测定 | 第28页 |
| ·细胞转化液中γ-氨基丁酸的定量测定 | 第28-29页 |
| ·不同培养基对菌株产GABA的影响 | 第29-30页 |
| ·辅酶对GABA产量的影响 | 第30页 |
| ·菌株的诱变 | 第30-31页 |
| ·硫酸二乙酯诱变剂量的确定 | 第31页 |
| ·诱变结果 | 第31-32页 |
| ·植物乳杆菌Lp-Lw-131-34的遗传稳定性 | 第32页 |
| ·本章小结 | 第32-33页 |
| 3 植物乳杆菌Lp-Lw-131-34发酵工艺的优化 | 第33-44页 |
| ·实验材料与仪器 | 第33-34页 |
| ·菌种 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·仪器与设备 | 第33-34页 |
| ·试验方法 | 第34页 |
| ·细胞反应液中GABA的定量测定 | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-43页 |
| ·培养基优化 | 第34-39页 |
| ·培养条件优化 | 第39-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 4 固定化细胞转化GABA的研究 | 第44-53页 |
| ·试验材料与仪器 | 第44-45页 |
| ·菌种 | 第44页 |
| ·试验试剂 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·仪器与设备 | 第44-45页 |
| ·试验方法 | 第45-46页 |
| ·游离细胞的制备 | 第45页 |
| ·固定化细胞的制备 | 第45页 |
| ·固定化细胞机械强度的测定 | 第45页 |
| ·细胞反应液中GABA含量的测定 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-52页 |
| ·不同包埋材料的选用 | 第46页 |
| ·海藻酸钠浓度对胶珠产GABA的影响 | 第46-47页 |
| ·氯化钙浓度对胶珠产GABA的影响 | 第47页 |
| ·固定化时间对胶珠产GABA的影响 | 第47-48页 |
| ·谷氨酸钠浓度对GABA产量的影响 | 第48-49页 |
| ·pH对GABA产量的影响 | 第49页 |
| ·温度对GABA产量的影响 | 第49-50页 |
| ·菌体浓度对GABA产量的影响 | 第50页 |
| ·正交试验结果 | 第50-51页 |
| ·验证试验 | 第51页 |
| ·固定化细胞转化GABA稳定性试验 | 第51-52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 5 植物乳杆菌Lp-Lw-131-34谷氨酸脱羧酶基因的克隆表达 | 第53-64页 |
| ·实验材料与仪器 | 第53-54页 |
| ·菌种 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·仪器与设备 | 第53-54页 |
| ·试验方法 | 第54-58页 |
| ·植物乳杆菌基因组DNA的提取 | 第54页 |
| ·植物乳杆菌GAD基因的PCR扩增 | 第54-55页 |
| ·质粒DNA和目的基因的双酶切 | 第55-56页 |
| ·大肠杆菌Trans Ⅰ感受态的制备(克隆载体) | 第56页 |
| ·阳性转化子菌液的PCR鉴定 | 第56-57页 |
| ·感受态细胞质粒的提取 | 第57页 |
| ·大肠杆菌BL21感受态细胞的制备(表达载体)以及质粒的转化 | 第57-58页 |
| ·谷氨酸脱羧酶基因的表达 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-63页 |
| ·植物乳杆菌Lp-Lw-131-34PCR扩增结果 | 第58页 |
| ·植物乳杆菌Lp-Lw-131-34基因扩增结果 | 第58页 |
| ·植物乳杆菌Lp-Lw-131-34基因测序 | 第58-60页 |
| ·植物乳杆菌Lp-Lw-131-34蛋白质序列理化参数 | 第60页 |
| ·蛋白质疏水性分析 | 第60页 |
| ·蛋白质信号肽预测 | 第60-61页 |
| ·N-糖基化 | 第61-62页 |
| ·蛋白质结构域分析 | 第62页 |
| ·Lp-Lw-131-34GAD蛋白质三级结构预测 | 第62-63页 |
| ·谷氨酸脱羧酶基因的表达 | 第63页 |
| ·结论 | 第63-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
