| 引言 | 第1-12页 |
| 第一部分 CRABP2的表达调控和TOB1的特征分析 | 第12-60页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| ABSTRACT | 第14-16页 |
| 总缩略词表 | 第16-17页 |
| 1 文献综述 | 第17-24页 |
| ·骨骼肌发育概述 | 第17-20页 |
| ·骨骼肌细胞C2C12概述 | 第20-21页 |
| ·CRABPs基因家族的研究进展 | 第21-23页 |
| ·TOB1基因的研究进展 | 第23-24页 |
| 2 研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 3 材料与方法 | 第25-41页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·样品 | 第25-26页 |
| ·DNA样品 | 第25页 |
| ·组织样品 | 第25页 |
| ·细胞样品 | 第25-26页 |
| ·载体和菌株 | 第26页 |
| ·试剂盒和酶 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·主要数据库 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-41页 |
| ·C2C12、PK15和293T细胞的培养 | 第27页 |
| ·C2C12细胞的分化 | 第27-28页 |
| ·C2C12细胞分化的鉴定 | 第28页 |
| ·H.E染色 | 第28页 |
| ·标志基因检测 | 第28页 |
| ·基因的表达谱分析 | 第28-30页 |
| ·总RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·cDNA的合成 | 第29页 |
| ·PCR引物的设计 | 第29页 |
| ·CRABPs基因家族相关成员在C2C12的RT-PCR分析 | 第29页 |
| ·CRABP2和TOBl在C2C12分化时期的Real time PCR分析 | 第29页 |
| ·表达谱的数据分析 | 第29-30页 |
| ·CRABP2真核表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·CRABP2基因片段的制备 | 第30页 |
| ·载体酶切 | 第30-31页 |
| ·PCR产物进入酶切真核表达载体 | 第31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31-32页 |
| ·菌液PCR鉴定 | 第32页 |
| ·质粒提取及酶切鉴定 | 第32页 |
| ·序列测定 | 第32页 |
| ·去内毒素质粒的提取 | 第32页 |
| ·猪TOB1亚细胞定位分析 | 第32-33页 |
| ·猪TOB1基因真核表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·PK15细胞转染 | 第33页 |
| ·转染后的PK15细胞染色和TOB1蛋白定位的观察 | 第33页 |
| ·293T细胞转染 | 第33-34页 |
| ·Western Blot检测 | 第34-36页 |
| ·细胞总蛋白抽提 | 第34页 |
| ·上样样品准备 | 第34-35页 |
| ·SDS-PAGE | 第35页 |
| ·免疫印迹 | 第35页 |
| ·免疫显色 | 第35-36页 |
| ·病毒的收获、浓缩及滴度的测定 | 第36页 |
| ·慢病毒转染C2C12细胞 | 第36-37页 |
| ·Real time PCR分析 | 第37页 |
| ·流式细胞分析 | 第37页 |
| ·CRABP2启动子的活性分析 | 第37-38页 |
| ·CRABP2启动子荧光素酶载体的构建 | 第37页 |
| ·C2C12细胞转染 | 第37-38页 |
| ·转染后的荧光素酶活性测定 | 第38页 |
| ·MyoD和Sp1转录因子的初步验证分析 | 第38-39页 |
| ·MyoD过表达载体的构建 | 第38页 |
| ·Sp1定点突变载体的构建 | 第38-39页 |
| ·凝胶阻滞电泳 | 第39-41页 |
| ·溶液的配制 | 第39页 |
| ·核蛋白的提取(针对贴壁细胞) | 第39页 |
| ·C2C12细胞核蛋白浓度的测定 | 第39-40页 |
| ·结合反应体系 | 第40-41页 |
| ·电泳和显影 | 第41页 |
| 4 实验结果 | 第41-57页 |
| ·C2C12细胞分化的鉴定 | 第41-42页 |
| ·H.E染色 | 第41页 |
| ·标志基因检测 | 第41-42页 |
| ·相关基因的表达谱分析 | 第42-44页 |
| ·相关基因的RT-PCR分析 | 第42-43页 |
| ·CRABP2和TOB1在C2C12分化时期的Real time PCR分析 | 第43-44页 |
| ·CRABP2的过表达研究 | 第44-49页 |
| ·CRABP2过表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·慢病毒包装 | 第45-47页 |
| ·Western Blot检测 | 第45页 |
| ·病毒滴度的计算 | 第45-47页 |
| ·慢病毒转染 | 第47页 |
| ·Realtime PCR分析 | 第47页 |
| ·流式细胞分析 | 第47-49页 |
| ·TOB1的亚细胞定位分析 | 第49-50页 |
| ·CRABP2启动子的活性分析 | 第50-53页 |
| ·CRABP2核心启动子区域的鉴定 | 第50-52页 |
| ·核心启动子区域的预测分析 | 第52-53页 |
| ·过表达MyoD和定点突变Sp1对小鼠CRABP2基因启动子的影响 | 第53-55页 |
| ·凝胶阻滞电泳(EMSA) | 第55-57页 |
| ·C2C12细胞核蛋白浓度的测定 | 第55页 |
| ·CRABP2基因启动子内MyoD和Sp1结合位点的确定 | 第55-57页 |
| 5 讨论 | 第57-58页 |
| 6 小结 | 第58-60页 |
| 第二部分 猪TIM4基因特征及其与免疫性状的关联分析 | 第60-83页 |
| 摘要 | 第60-61页 |
| ABSTRACT | 第61-62页 |
| 1 文献综述 | 第62-67页 |
| ·TIM基因家族概述 | 第62-63页 |
| ·TIM基因家族的结构特征 | 第63页 |
| ·TIM基因家族的生物学功能 | 第63-64页 |
| ·TIM4基因的研究进展 | 第64-67页 |
| 2 研究的目的和意义 | 第67页 |
| 3 材料与方法 | 第67-74页 |
| ·实验材料 | 第67-69页 |
| ·样品 | 第67-68页 |
| ·DNA样品 | 第67-68页 |
| ·组织样品 | 第68页 |
| ·细胞样品 | 第68页 |
| ·载体和菌株 | 第68页 |
| ·试剂盒和酶 | 第68页 |
| ·主要试剂 | 第68页 |
| ·主要仪器 | 第68-69页 |
| ·主要数据库 | 第69页 |
| ·实验方法 | 第69-74页 |
| ·猪TIM4基因序列的分离方法 | 第69-71页 |
| ·猪TIM4基因cDNA序列的分离方法 | 第69-70页 |
| ·猪TIM4基因组序列的分离方法 | 第70-71页 |
| ·猪TIM4基因表达谱分析 | 第71-72页 |
| ·总RNA的提取 | 第71页 |
| ·cDNA的合成 | 第71页 |
| ·Real-time PCR引物设计 | 第71页 |
| ·猪TIM4基因的组织表达谱分析 | 第71页 |
| ·表达谱的数据分析 | 第71-72页 |
| ·猪TIM4亚细胞定位分析 | 第72页 |
| ·猪TIM4基因真核表达载体的构建 | 第72页 |
| ·PK15细胞培养和转染 | 第72页 |
| ·转染后的细胞染色和蛋白定位的观察 | 第72页 |
| ·猪TIM4基因启动子的特征分析 | 第72-73页 |
| ·猪TIM4基因启动子序列的获得 | 第72-73页 |
| ·猪TIM4基因启动子的预测分析 | 第73页 |
| ·猪TIM4基因的多态性检测 | 第73页 |
| ·引物设计 | 第73页 |
| ·PCR扩增 | 第73页 |
| ·PCR产物直接测序 | 第73页 |
| ·实验猪资源群体性状测定 | 第73-74页 |
| ·免疫性状关联分析 | 第74页 |
| 4 实验结果 | 第74-80页 |
| ·猪TIM4基因组序列特征分析 | 第74-76页 |
| ·猪TIM4基因组织表达谱分析 | 第76-77页 |
| ·猪TIM4亚细胞定位分析 | 第77-78页 |
| ·猪TIM4基因启动子特征分析 | 第78-79页 |
| ·猪TIM4基因遗传多态性位点检测 | 第79页 |
| ·关联分析 | 第79-80页 |
| 5 讨论 | 第80-82页 |
| 6 小结 | 第82-83页 |
| 总结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-97页 |
| 附录 | 第97-109页 |
| 在读期间发表文章 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
