| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 缩略语表 | 第15-17页 |
| 前言 | 第17-18页 |
| 第1章 文献综述 | 第18-36页 |
| ·副猪嗜血杆菌概述 | 第18页 |
| ·副猪嗜血杆菌病的诊断 | 第18-21页 |
| ·临床及病理学诊断 | 第18-19页 |
| ·副猪嗜血杆菌感染的实验室诊断方法 | 第19-21页 |
| ·流行病学及分型 | 第21-25页 |
| ·血清分型 | 第22页 |
| ·基因分型 | 第22-25页 |
| ·毒力因子的高通量筛选 | 第25-27页 |
| ·副猪嗜血杆菌疫苗相关研究 | 第27-30页 |
| ·全菌疫苗 | 第27-28页 |
| ·组分疫苗 | 第28-29页 |
| ·免疫学相关研究 | 第29-30页 |
| ·细菌遗传操作工具的构建 | 第30-31页 |
| ·复制子的选择 | 第30页 |
| ·筛选标记的选择 | 第30-31页 |
| ·位点特异性重组酶的成员及应用 | 第31-36页 |
| ·位点特异性重组:酶及机制 | 第31-33页 |
| ·作用靶点和辅助因子 | 第33-36页 |
| 第2章 副猪嗜血杆菌内源性质粒的分离与分析 | 第36-65页 |
| ·研究目的意义 | 第36页 |
| ·实验材料 | 第36-41页 |
| ·引物序列 | 第36页 |
| ·菌株 | 第36-37页 |
| ·载体 | 第37-38页 |
| ·主要药品与试剂盒 | 第38-39页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第39页 |
| ·主要溶液的配制 | 第39-40页 |
| ·主要实验器材 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-51页 |
| ·质粒的抽提(筛选野生质粒) | 第41页 |
| ·野生质粒的大量制备及纯化(用作测序模板) | 第41-42页 |
| ·质粒宿主菌株的鉴定 | 第42页 |
| ·质粒的测序策略 | 第42-48页 |
| ·DNA的操作 | 第48-49页 |
| ·CaCl_2介导的转化感受态细胞的制备 | 第49-50页 |
| ·热激转化法 | 第50页 |
| ·重组质粒的抽提(鉴定测序用转化子) | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-61页 |
| ·副猪嗜血杆菌临床分离株中内源性质粒的筛选 | 第51-52页 |
| ·质粒宿主菌株的鉴定 | 第52页 |
| ·质粒pYZ18序列分析 | 第52-54页 |
| ·质粒pYC93的序列分析 | 第54-55页 |
| ·质粒pHN61的序列分析 | 第55-57页 |
| ·质粒pFZ51的序列分析 | 第57-59页 |
| ·质粒pWH24的序列分析 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-65页 |
| ·副猪嗜血杆菌内源性质粒的筛选和抽提 | 第61-62页 |
| ·内源性质粒的序列分析 | 第62-63页 |
| ·质粒之于细菌耐药性的传播 | 第63-65页 |
| 第3章 副猪嗜血杆菌遗传操作工具的构建 | 第65-100页 |
| ·研究目的意义 | 第65页 |
| ·实验材料 | 第65-73页 |
| ·引物序列 | 第65页 |
| ·菌株 | 第65-68页 |
| ·载体 | 第68-70页 |
| ·主要药品、材料与试剂盒 | 第70页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第70-71页 |
| ·主要溶液的配制 | 第71-73页 |
| ·主要实验器材 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-85页 |
| ·大肠杆菌—副猪嗜血杆菌穿梭载体pSHK4的构建 | 第73-76页 |
| ·温敏复制型系列载体的构建 | 第76-78页 |
| ·副猪嗜血杆菌表达载体pK3EX的构建 | 第78-79页 |
| ·副猪嗜血杆菌无细胞抽提物的制备 | 第79-81页 |
| ·质粒的体外修饰 | 第81页 |
| ·副猪嗜血杆菌的电转化 | 第81-82页 |
| ·副猪嗜血杆菌突变株的构建 | 第82-83页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第83-84页 |
| ·Western Blotting检测目的蛋白 | 第84-85页 |
| ·结果与分析 | 第85-93页 |
| ·穿梭载体pSHK4的构建 | 第85-86页 |
| ·应用pSHK4优化副猪嗜血杆菌电转化方法 | 第86-87页 |
| ·温敏复制型载体pSHK4~(TS)的构建及应用 | 第87-89页 |
| ·温敏复制型载体pCK5~(TS)和pAK5~(TS)的构建 | 第89页 |
| ·温敏载体pAK5~(TS)和pCK5~(TS)的应用 | 第89-90页 |
| ·表达载体pK3EX的构建 | 第90-91页 |
| ·表达载体pK3EX的功能验证 | 第91-93页 |
| ·讨论 | 第93-100页 |
| ·质粒的体外修饰有效提高了副猪嗜血杆菌的电转化效率 | 第93-95页 |
| ·E.coli-H.parasuis穿梭载体的构建 | 第95-96页 |
| ·温敏复制型载体为副猪嗜血杆菌基因缺失株的构建奠定基础 | 第96-98页 |
| ·表达载体为副猪嗜血杆菌体内表达基因的功能研究提供便利 | 第98-100页 |
| 第4章 结论 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 在读期间科研成果 | 第120-121页 |
| 附录 | 第121-133页 |
| 附录一 野生质粒核苷酸序列 | 第121-130页 |
| 附录二 本研究构建的载体核苷酸序列 | 第130-133页 |
