| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| ·富马酸概述 | 第7-8页 |
| ·富马酸的应用 | 第7-8页 |
| ·富马酸的合成方法 | 第8页 |
| ·马来酸顺反异构酶概述 | 第8-10页 |
| ·MaiA 酶性质的研究 | 第9页 |
| ·MaiA 酶反应机制的研究 | 第9-10页 |
| ·发酵过程优化的策略 | 第10-11页 |
| ·本课题的立题依据和意义 | 第11-12页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-26页 |
| ·材料 | 第13-17页 |
| ·菌种与质粒 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13-14页 |
| ·培养基 | 第14页 |
| ·主要溶液 | 第14-16页 |
| ·主要仪器与设备 | 第16-17页 |
| ·马来酸顺反异构酶的克隆表达与纯化方法 | 第17-23页 |
| ·粘质沙雷氏菌基因组 DNA 的提取 | 第17页 |
| ·PCR 引物设计 | 第17-18页 |
| ·目的基因 maiA 的 PCR 扩增 | 第18页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第18-19页 |
| ·质粒的提取 | 第19页 |
| ·酶切及胶回收 | 第19-20页 |
| ·载体连接 | 第20页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第20页 |
| ·大肠杆菌感受态转化方法 | 第20-21页 |
| ·转化子的筛选与鉴定 | 第21-22页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第22页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第22页 |
| ·SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第22-23页 |
| ·马来酸顺反异构酶的酶学性质分析方法 | 第23-25页 |
| ·酶活测定方法 | 第23-24页 |
| ·MaiA 酶最适温度 Tempopt的测定方法 | 第24页 |
| ·MaiA 酶最适 pHopt的测定方法 | 第24页 |
| ·MaiA 酶热稳定性的测定方法 | 第24-25页 |
| ·重组酶反应动力学参数的测定方法 | 第25页 |
| ·重组大肠杆菌的发酵优化 | 第25-26页 |
| ·发酵培养方法 | 第25页 |
| ·正交试验的设计 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-39页 |
| ·粘质沙雷氏菌 MaiA 基因在 E. coli 中的克隆及表达纯化 | 第26-29页 |
| ·重组质粒 pET24a(+)-maiA 的构建 | 第26-28页 |
| ·MaiA 重组蛋白的表达 | 第28页 |
| ·MaiA 重组蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| ·马来酸顺反异构酶的酶学性质分析 | 第29-32页 |
| ·马来酸顺反异构酶的最适温度 | 第29页 |
| ·马来酸顺反异构酶的最适 pH | 第29-30页 |
| ·马来酸顺反异构酶的酶学常数测定 | 第30-31页 |
| ·马来酸顺反异构酶的热稳定性研究 | 第31页 |
| ·底物浓度对马来酸顺反异构酶催化效率的影响 | 第31-32页 |
| ·重组 E. coli BL21(DE3)/ pET-24a(+)-maiA 的摇瓶发酵条件优化 | 第32-39页 |
| ·碳源对菌体生长及产酶的影响 | 第32-33页 |
| ·氮源对菌体生长及产酶的影响 | 第33-34页 |
| ·金属离子对菌体生长及产酶的影响 | 第34-35页 |
| ·发酵培养基正交试验设计 | 第35-37页 |
| ·装液量和转速对重组大肠杆菌发酵产马来酸顺反异构酶的影响 | 第37-39页 |
| 主要结论与展望 | 第39-41页 |
| 主要结论 | 第39页 |
| 展望 | 第39-41页 |
| 致谢 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第46页 |
