| 中国农业科学院博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-28页 |
| ·抗巴贝斯虫药物研究应用现状 | 第13-16页 |
| ·化学药物 | 第13-15页 |
| ·生物药物 | 第15-16页 |
| ·植物天然产物 | 第16页 |
| ·药物靶标及其 MEP 途径 | 第16-19页 |
| ·顶质体 | 第16-17页 |
| ·MVA 与 MEP 途径 | 第17-18页 |
| ·MEP 途径——潜在的药物靶标 | 第18-19页 |
| ·MEP 途径酶的研究现状 | 第19-27页 |
| ·DXS | 第19-22页 |
| ·DXS 酶的催化机理 | 第19-20页 |
| ·DXS 的结构特征 | 第20页 |
| ·DXS 抑制剂的研究现状 | 第20-22页 |
| ·DXR | 第22-24页 |
| ·DXR 的催化机理 | 第22页 |
| ·DXR 的结构特征 | 第22页 |
| ·DXR 抑制剂的研究现状 | 第22-24页 |
| ·MEP 途径的其他酶 | 第24-27页 |
| ·IspD/ygbP、IspE/ychB 和 IspF/ygbB | 第24-26页 |
| ·IspG/GcpE，IspH/LytB | 第26-27页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 牛巴贝斯虫 MEP 途径相关基因的克隆及序列分析 | 第28-40页 |
| ·材料与方法 | 第28-31页 |
| ·虫株 | 第28页 |
| ·RNA 的提取及 cDNA 的合成 | 第28-29页 |
| ·目的基因的克隆及测序 | 第29-31页 |
| ·测序结果的分析 | 第31页 |
| ·结果分析 | 第31-39页 |
| ·DXS 基因的扩增和序列分析 | 第31-35页 |
| ·DXR 基因的扩增和序列分析 | 第35-36页 |
| ·IspD/YgbP 基因的扩增和序列分析 | 第36页 |
| ·IspE/YchB 基因的扩增和序列分析 | 第36-37页 |
| ·IspF/YgbB 基因的扩增和序列分析 | 第37-38页 |
| ·IspG/GcpE 基因的扩增和序列分析 | 第38页 |
| ·IspH/LytB 基因的扩增和序列分析 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 牛巴贝斯虫 DXS 酶表达载体的构建 | 第40-53页 |
| ·材料与方法 | 第40-46页 |
| ·同源重组敲除 DXS 基因载体的构建 | 第40-42页 |
| ·DXS 表达载体的构建 | 第42-44页 |
| ·DXS 点突变原核表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·结果 | 第46-51页 |
| ·同源重组敲除 DXS 基因载体的构建 | 第46-48页 |
| ·DXS 表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·DXS 点突变原核表达载体的构建 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·同源重组敲除 DXS 基因载体的构建 | 第51页 |
| ·DXS 表达载体的构建 | 第51-52页 |
| ·DXS 点突变表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 第四章 牛巴贝斯虫 DXS 酶的表达及酶学性质 | 第53-64页 |
| ·材料与方法 | 第53-56页 |
| ·重组 DXS 酶表达条件的优化 | 第53页 |
| ·重组 DXS 蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| ·重组 DXS 酶的浓度测定 | 第54页 |
| ·重组 DXS 多抗的制备 | 第54-55页 |
| ·重组 DXS 和天然 DXS 的检测 | 第55页 |
| ·重组 DXS 的酶活测定 | 第55-56页 |
| ·重组 DXS 的酶活测定动力学试验 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-62页 |
| ·重组 DXS 酶的表达及纯化 | 第56-58页 |
| ·重组 DXS 酶的浓度测定 | 第58-59页 |
| ·重组 DXS 和天然 DXS 的检测 | 第59页 |
| ·重组 DXS 的酶活测定 | 第59-60页 |
| ·重组 DXS 的酶动力学试验 | 第60-62页 |
| ·点突变 DXS 对酶活的影响 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| ·酶动力学参数测定方法 | 第62-63页 |
| ·酶动力学参数 | 第63页 |
| ·氨基酸位点突变对酶活的影响 | 第63-64页 |
| 第五章 DXS 酶与底物和抑制剂的作用及抑制剂的模拟筛选 | 第64-78页 |
| ·材料与方法 | 第64-67页 |
| ·EcDXS 与丙酮酸的对接 | 第64-65页 |
| ·EcDXS 与 ketoclomazone 的对接 | 第65页 |
| ·BbDXS 与 TPP 和丙酮酸的对接 | 第65页 |
| ·虚拟筛选 | 第65-67页 |
| ·结果 | 第67-76页 |
| ·EcDXS 与丙酮酸的对接 | 第67-69页 |
| ·EcDXS 与 ketoclomazone 的对接 | 第69-71页 |
| ·BbDXS 与 TPP 和丙酮酸的对接 | 第71-73页 |
| ·药效团模型的构建 | 第73-75页 |
| ·化合物库筛选 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| ·底物与 DXS 的对接 | 第76-77页 |
| ·虚拟筛选 | 第77-78页 |
| 第六章 全文结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 作者简历 | 第89页 |
