| 中国农业科学院博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 图表目录 | 第15-17页 |
| 英文缩略表 | 第17-18页 |
| 第一章 引言 | 第18-31页 |
| ·网状内皮组织增生病病毒 | 第18-22页 |
| ·历史背景 | 第18-19页 |
| ·分类 | 第19页 |
| ·形态结构 | 第19页 |
| ·基因组及其编码蛋白 | 第19页 |
| ·病毒复制 | 第19-20页 |
| ·流行病学 | 第20-21页 |
| ·发病机理 | 第21页 |
| ·诊断 | 第21页 |
| ·防治措施 | 第21-22页 |
| ·畜禽基因工程疫苗研究进展 | 第22-25页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第23-24页 |
| ·核酸疫苗 | 第24页 |
| ·联合免疫 | 第24-25页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第25-29页 |
| ·毕赤酵母的生物学特性 | 第25-26页 |
| ·毕赤酵母表达系统的特点 | 第26-27页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达及影响因素 | 第27-29页 |
| ·问题与展望 | 第29-30页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第30-31页 |
| 第二章 禽网状内皮组织增生病病毒对不同日龄 SPF 鸡的致病性研究 | 第31-44页 |
| 摘要 | 第31页 |
| ·材料和方法 | 第31-35页 |
| ·病毒及实验动物 | 第31页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第31-32页 |
| ·Real-time PCR 引物及探针合成 | 第32页 |
| ·序列比对 | 第32-33页 |
| ·REV 感染试验 | 第33页 |
| ·病理变化 | 第33-34页 |
| ·病毒载量测定 | 第34页 |
| ·抗体滴度检测 | 第34页 |
| ·淋巴细胞数目检测 | 第34-35页 |
| ·AIV 和 NDV 疫苗的免疫及抗体反应的检测 | 第35页 |
| ·统计学分析 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-42页 |
| ·gp90 基因序列比对与进化分析 | 第35-36页 |
| ·REV 感染对 SPF 鸡体重和器官指数的影响 | 第36-38页 |
| ·REV 感染对 SPF 鸡的病理损伤 | 第38-40页 |
| ·REV 感染 SPF 鸡后血液和各器官的病毒载量 | 第40-41页 |
| ·REV 感染 SPF 鸡后的抗体滴度 | 第41页 |
| ·REV 感染 SPF 鸡后淋巴细胞数目的变化 | 第41-42页 |
| ·REV 感染对 NDV 和 AIV 疫苗免疫效果的抑制作用 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 禽网状内皮组织增生病病毒 gp90 蛋白在毕赤酵母中的表达及优化 | 第44-62页 |
| 摘要 | 第44-45页 |
| ·材料和方法 | 第45-51页 |
| ·毒株、质粒和菌株 | 第45页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第45页 |
| ·引物合成 | 第45页 |
| ·gp90 全长基因的扩增 | 第45-46页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第46-48页 |
| ·电转化 | 第48页 |
| ·重组酵母菌株的筛选 | 第48页 |
| ·重组酵母菌株的 PCR 鉴定 | 第48-49页 |
| ·gp90 基因插入拷贝数的检测 | 第49页 |
| ·重组表达菌株在摇瓶中的诱导表达 | 第49-50页 |
| ·重组表达菌株的发酵培养及优化 | 第50页 |
| ·SDS-PAGE 和 Western blot | 第50页 |
| ·gp90 重组蛋白表达量的检测 | 第50页 |
| ·gp90 重组蛋白免疫原性的检测 | 第50-51页 |
| ·gp90 重组蛋白安全性的检测 | 第51页 |
| ·统计学分析 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-59页 |
| ·gp90 和分子伴侣 PDI、Ubi4 基因的扩增 | 第51-52页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第52页 |
| ·重组酵母菌株的筛选 | 第52-53页 |
| ·酵母宿主菌的优化 | 第53页 |
| ·gp90 插入拷贝数的优化 | 第53-54页 |
| ·不同启动子对 gp90 重组蛋白表达的影响 | 第54-56页 |
| ·分子伴侣对 gp90 重组蛋白表达的影响 | 第56页 |
| ·gp90 重组酵母菌株发酵条件的优化 | 第56-59页 |
| ·gp90 重组蛋白的免疫原性和安全性 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| 第四章 禽网状内皮组织增生病亚单位疫苗的免疫效力及安全性研究 | 第62-77页 |
| 摘要 | 第62-63页 |
| ·材料和方法 | 第63-66页 |
| ·毒株和菌株 | 第63页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第63页 |
| ·实验动物 | 第63页 |
| ·RE 重组亚单位疫苗的制备 | 第63-64页 |
| ·免疫程序和最小免疫剂量试验 | 第64页 |
| ·免疫持续期试验 | 第64页 |
| ·种鸡的免疫试验 | 第64-65页 |
| ·REV 抗体滴度的检测 | 第65页 |
| ·中和试验 | 第65页 |
| ·安全性试验 | 第65-66页 |
| ·统计学分析 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-73页 |
| ·RE 重组亚单位疫苗的制备 | 第66页 |
| ·RE 重组亚单位疫苗的免疫程序和最小免疫剂量 | 第66-67页 |
| ·REV 抗体滴度与攻毒保护相关性 | 第67-68页 |
| ·RE 重组亚单位疫苗的免疫持续期 | 第68-69页 |
| ·RE 亚单位疫苗免疫种鸡后的抗体反应 | 第69-70页 |
| ·RE 亚单位疫苗免疫种鸡后的卵黄抗体 | 第70页 |
| ·RE 亚单位疫苗免疫种鸡后的子代雏鸡母源抗体 | 第70-71页 |
| ·母源抗体对子代雏鸡的免疫保护作用 | 第71-73页 |
| ·RE 重组亚单位疫苗的安全性 | 第73页 |
| ·讨论 | 第73-77页 |
| 第五章 禽网状内皮组织增生病 DNA 疫苗的构建及与亚单位疫苗的联合免疫 | 第77-88页 |
| 摘要 | 第77-78页 |
| ·材料和方法 | 第78-81页 |
| ·病毒株、细胞和质粒 | 第78页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第78页 |
| ·实验动物 | 第78-79页 |
| ·DNA 疫苗的构建 | 第79页 |
| ·DNA 疫苗质粒在 DF1 细胞中的表达 | 第79页 |
| ·间接免疫荧光和 Western blot 试验 | 第79-80页 |
| ·动物实验 | 第80页 |
| ·疫苗免疫后体液免疫应答的检测 | 第80页 |
| ·淋巴细胞增殖试验 | 第80-81页 |
| ·细胞因子的检测 | 第81页 |
| ·统计学分析 | 第81页 |
| ·结果 | 第81-85页 |
| ·DNA 疫苗质粒的体外表达检测 | 第81-83页 |
| ·疫苗免疫后的抗体反应 | 第83页 |
| ·疫苗免疫后的细胞免疫反应 | 第83-85页 |
| ·攻毒保护 | 第85页 |
| ·讨论 | 第85-88页 |
| 第六章 全文结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 作者简历 | 第105-106页 |
