| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-36页 |
| 1 猪链球菌研究概况 | 第16-17页 |
| ·猪链球菌与猪链球菌病 | 第16-17页 |
| ·猪链球菌耐药现状 | 第17页 |
| 2 氟喹诺酮类抗菌药的研究概况 | 第17-18页 |
| ·喹诺酮类抗菌药分类 | 第17-18页 |
| ·药动学特征 | 第18页 |
| ·抗菌谱 | 第18页 |
| 3 猪链球菌与氟喹诺酮类药物 | 第18-25页 |
| ·猪链球菌对氟喹诺酮类药物耐药性的国内外研究概况 | 第18-19页 |
| ·氟睦诺酮类药物的使用与细菌耐药性之间的关系 | 第19-25页 |
| ·喹诺酮类抗菌药的抗菌机制 | 第19-20页 |
| ·细菌应对氟喹诺酮类药物的机制 | 第20页 |
| ·细菌对氟喹诺酮类抗菌药物的耐药机制 | 第20-24页 |
| ·猪链球菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制 | 第24-25页 |
| 4 克服耐药性的对策 | 第25-28页 |
| ·合理用药 | 第25-26页 |
| ·减少用药加强监测 | 第25页 |
| ·防止滥用 | 第25页 |
| ·选择性用药 | 第25-26页 |
| ·加强联合用药 | 第26页 |
| ·开发新药或制剂 | 第26-28页 |
| ·开发对耐药菌有作用的新型药物 | 第26页 |
| ·开发生物制剂 | 第26页 |
| ·渗透性促进剂 | 第26页 |
| ·开发外排泵抑制剂(Efflux pump inhibitor,EPIs) | 第26-28页 |
| 参考文献 | 第28-36页 |
| 第二章 人工诱导氟喹诺酮耐药猪链球菌的生长特性及靶位突变分析 | 第36-46页 |
| 摘要 | 第36-37页 |
| 1 材料与方法 | 第37-40页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·药品与试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·体外最小抑菌浓度(MIC)的测定 | 第37-38页 |
| ·诱导株及其亲本株生长曲线的测定 | 第38页 |
| ·制备菌液 | 第38页 |
| ·菌液取样测定 | 第38页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第38页 |
| ·gyrA、gyrB、parC和parE的耐药决定区(QRDR)突变位点分析 | 第38-40页 |
| ·引物设计 | 第38-39页 |
| ·细菌总DNA抽提 | 第39页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第39页 |
| ·PCR产物回收 | 第39页 |
| ·PCR产物测序 | 第39-40页 |
| 2 结果 | 第40-42页 |
| ·四种氟喹诺酮类抗菌药对受试猪链球菌菌株的MIC | 第40页 |
| ·猪链球菌诱导耐药株与其亲本株的生长曲线 | 第40-41页 |
| ·gyrA、gyrB、parC和parE耐药决定区(QRDR)突变位点分析 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-46页 |
| 第三章 人工诱导氟喹诺酮耐药猪链球菌外排泵的检测 | 第46-58页 |
| 摘要 | 第46-47页 |
| 1 材料与方法 | 第47-49页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·菌株 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·药品与试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-49页 |
| ·联合使用利血平后MIC的测定 | 第47页 |
| ·生长抑制试验 | 第47-48页 |
| ·环丙沙星蓄积试验 | 第48-49页 |
| ·样品采集与处理 | 第48页 |
| ·色谱条件 | 第48页 |
| ·标准曲线制作 | 第48页 |
| ·数据分析 | 第48-49页 |
| 2 结果 | 第49-55页 |
| ·联合使用利血平后恩诺沙星和环丙沙星对不同菌株的MIC | 第49页 |
| ·环丙沙星对不同菌株的生长抑制试验 | 第49-52页 |
| ·不同菌株对环丙沙星的蓄积功能 | 第52-55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-58页 |
| 第四章 人工诱导耐药菌株satA、satB和smrA的mRNA表达水平 | 第58-74页 |
| 摘要 | 第58-59页 |
| 1 材料与方法 | 第59-64页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·菌株 | 第59页 |
| ·培养基 | 第59页 |
| ·药品与试剂 | 第59页 |
| ·主要仪器 | 第59-60页 |
| ·方法 | 第60-64页 |
| ·目的基因的扩增 | 第60-61页 |
| ·Real time RT-PCR | 第61-64页 |
| ·细菌的培养与RNA提取 | 第61页 |
| ·RNA的纯化处理 | 第61-62页 |
| ·RNA纯度和完整性的检测 | 第62页 |
| ·RNA反转录 | 第62-63页 |
| ·Real time PCR引物设计 | 第63页 |
| ·荧光定量扩增 | 第63页 |
| ·数据分析 | 第63-64页 |
| 2 结果 | 第64-69页 |
| ·目的基因的扩增 | 第64页 |
| ·RNA完整性、纯度及质量检测 | 第64-66页 |
| ·Real time PGR 结果 | 第66-69页 |
| ·标准曲线 | 第66页 |
| ·内参与目的基因的溶解、扩增曲线 | 第66-68页 |
| ·基因表达量分析 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-72页 |
| 参考文献 | 第72-74页 |
| 第五章 猪链球菌satB基因缺失株的构建 | 第74-84页 |
| 摘要 | 第74页 |
| 1 材料和方法 | 第74-79页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第74-75页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第75-76页 |
| ·satB基因敲除突变株的构建和鉴定 | 第76-79页 |
| ·基因敲除质粒的构建 | 第76-78页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第76页 |
| ·片段扩增及质粒构建 | 第76-78页 |
| ·基因敲除质粒的酶切鉴定 | 第78-79页 |
| ·感受态细菌的制备 | 第79页 |
| ·电转化 | 第79页 |
| ·突变株的筛选与鉴定 | 第79页 |
| ·敲除菌株生长特性及MIC的测定 | 第79页 |
| 2 结果 | 第79-82页 |
| ·缺失质粒pSET4s-L-Cat-R及pSET4s-RH片段的扩增 | 第79-80页 |
| ·satB基因上下游序列及Cat基因的扩增 | 第79-80页 |
| ·RH-1、RH-2片段的扩增 | 第80页 |
| ·重组质粒pSET4s-L-Cat-R及pSET4s-RH的PCR鉴定与酶切鉴定 | 第80-82页 |
| ·重组质粒pSET4s-L-Cat-R的PCR与酶切鉴定 | 第80-81页 |
| ·重组质粒pSET4s-RH的PCR与酶切鉴定 | 第81-82页 |
| ·基因缺失株的鉴定 | 第82页 |
| 3 讨论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-86页 |
| 全文结论 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
