| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 英文缩率词表(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 前言 | 第12-13页 |
| 2 iPS细胞产生和鉴定 | 第13-18页 |
| ·iPS细胞的产生 | 第13-17页 |
| ·安全性 | 第13-15页 |
| ·诱导效率 | 第15-17页 |
| ·iPS细胞的鉴定 | 第17-18页 |
| ·细胞形态 | 第17页 |
| ·自我更新能力 | 第17页 |
| ·碱性磷酸酶活性 | 第17页 |
| ·胚胎干细胞标记基因的表达 | 第17页 |
| ·DNA微阵列分析 | 第17页 |
| ·启动子甲基化状况分析 | 第17-18页 |
| ·体外分化特性 | 第18页 |
| ·畸胎瘤 | 第18页 |
| 3 iPS细胞的应用 | 第18-20页 |
| ·iPS细胞的应用价值 | 第18-19页 |
| ·临床疾病方面的研究 | 第19-20页 |
| 4 其它的一些研究成果 | 第20-21页 |
| 第二章 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 第三章 异源因子诱导山羊iPS细胞 | 第22-53页 |
| 1 试验材料 | 第22-24页 |
| ·试验动物 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器和设备 | 第22-23页 |
| ·溶液的配制 | 第23-24页 |
| 2 试验方法 | 第24-35页 |
| ·质粒获取 | 第24-26页 |
| ·质粒回收 | 第24页 |
| ·质粒转化 | 第24-25页 |
| ·质粒提取 | 第25-26页 |
| ·质粒双酶切鉴定 | 第26页 |
| ·细胞分离培养 | 第26-29页 |
| ·MEF分离培养 | 第26-28页 |
| ·山羊耳尖成纤维细胞(goat ear fibroblasts,GEF)分离培养 | 第28页 |
| ·293T细胞培养、冻存和复苏 | 第28-29页 |
| ·GEF核型分析 | 第29页 |
| ·绘制GEF生长曲线 | 第29页 |
| ·慢病毒包装 | 第29-30页 |
| ·病毒滴度测定 | 第30-31页 |
| ·病毒上清提取RNA | 第30-31页 |
| ·绝对定量PCR测定慢病毒滴度 | 第31页 |
| ·慢病毒上清纯化 | 第31页 |
| ·饲养层制备 | 第31-32页 |
| ·慢病毒感染供体细胞 | 第32-33页 |
| ·悬浮感染 | 第32页 |
| ·贴壁感染 | 第32-33页 |
| ·AKP染色 | 第33页 |
| ·免疫细胞化学染色 | 第33-34页 |
| ·iPS细胞和GEF RNA提取 | 第34页 |
| ·外源因子扩增 | 第34-35页 |
| ·内源ES细胞标记基因扩增 | 第35页 |
| 3 结果分析 | 第35-45页 |
| ·质粒提取 | 第35-36页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·GEF和MEF分离培养 | 第37-38页 |
| ·293T细胞培养 | 第38页 |
| ·GEF核型分析 | 第38-39页 |
| ·GEF生长曲线绘制 | 第39页 |
| ·病毒滴度测定 | 第39-41页 |
| ·慢病毒感染供体细胞 | 第41-42页 |
| ·AKP染色 | 第42页 |
| ·免疫细胞化学染色 | 第42-43页 |
| ·外源因子扩增 | 第43页 |
| ·内源ES细胞标记基因检测 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-53页 |
| ·载体 | 第45页 |
| ·细胞分离、培养及传代等 | 第45-46页 |
| ·慢病毒包装 | 第46-47页 |
| ·慢病毒滴度测定 | 第47-48页 |
| ·慢病毒感染 | 第48页 |
| ·饲养层制备 | 第48页 |
| ·不同饲养层对iPS诱导的影响 | 第48-49页 |
| ·供体细胞 | 第49页 |
| ·iPS细胞活力 | 第49-50页 |
| ·诱导效果 | 第50-51页 |
| ·AKP染色和免疫细胞化学染色 | 第51页 |
| ·外源因子PCR扩增 | 第51-52页 |
| ·内源ES细胞标记基因PCR扩增 | 第52-53页 |
| 小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61页 |