| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 1 与脂肪组织代谢调节相关的基因 | 第12-14页 |
| ·PPAR | 第12-13页 |
| ·PGC1 | 第13页 |
| ·SREBPs | 第13-14页 |
| ·LEPTIN | 第14页 |
| 2 ATF4基因的研究进展 | 第14-16页 |
| 第一部分:猪ATF4基因表达分析及其与生产性状的关联分析 | 第16-29页 |
| 1 实验目的 | 第16页 |
| 2 材料和方法 | 第16-23页 |
| ·试验材料 | 第16-17页 |
| ·实验猪种 | 第16-17页 |
| ·相关组织样品 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-23页 |
| ·猪血液基因组DNA提取及检测 | 第17-18页 |
| ·猪各组织总RNA的提取 | 第18-19页 |
| ·提取总RNA检测及浓度测定 | 第19页 |
| ·提取总RNA的处理及反转录成cDNA的步骤 | 第19-20页 |
| ·目的基因ATF4的获取 | 第20-21页 |
| ·PCR扩增及序列分析 | 第21页 |
| ·PCR-RFLP分型 | 第21-22页 |
| ·数据统计分析 | 第22页 |
| ·表达谱分析 | 第22-23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-27页 |
| ·猪ATF4基因的克隆及序列分析 | 第23-24页 |
| ·猪ATF4基因的SNP研究 | 第24-25页 |
| ·猪ATF4基因AluI-RFLP基因型与生产性状的关联分析 | 第25-26页 |
| ·猪ATF4基因在大白猪和梅山猪背最长肌的表达分析 | 第26页 |
| ·猪ATF4基因在大白猪和梅山猪不同组织中的表达分析 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 第二部分:猪ATF4基因启动子区域分析及活性鉴定 | 第29-41页 |
| 1 实验目的 | 第29页 |
| 2 实验材料与方法 | 第29-32页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·引物的设计及启动子的克隆 | 第29-30页 |
| ·猪ATF4启动子缺失片段报告基因载体的构建 | 第30-31页 |
| ·细胞的培养前准备工作及细胞的培养 | 第31-32页 |
| ·猪ATF4启动子报告基因的转染 | 第32页 |
| ·猪ATF4启动子报告基因的活性检测 | 第32页 |
| 3. 结果与分析 | 第32-39页 |
| ·猪ATF4启动子的生物信息学分析及预测 | 第32-34页 |
| ·猪ATF4基因CpG岛的预测 | 第32-33页 |
| ·猪ATF4基因转录因子结合位点及转录起始位点的预测 | 第33-34页 |
| ·猪ATF4启动子的克隆鉴定 | 第34-37页 |
| ·猪ATF4启动子缺失片段报告基因的检测 | 第37-38页 |
| ·猪ATF4启动子活性的检测 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三部分:猪ATF4基因真核表达载体的构建 | 第41-51页 |
| 1 实验目的 | 第41页 |
| 2 材料和方法 | 第41-45页 |
| ·试验材料 | 第41-42页 |
| ·实验样品 | 第41页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第41-42页 |
| ·菌种、载体和细胞 | 第42页 |
| ·主要的试验仪器与设备 | 第42页 |
| ·常用的生物学网站及相关软件 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·猪ATF4全长cDNA的获得 | 第42-43页 |
| ·猪ATF4克隆及鉴定 | 第43页 |
| ·pcDNA3.1(+)-ATF4真核超表达载体的构建及酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·pcDNA3.1(+)-ATF4重组质粒转染细胞 | 第44页 |
| ·细胞RNA的提取及反转录 | 第44-45页 |
| ·实时荧光定量PCR检测 | 第45页 |
| 3 实验结果与分析 | 第45-49页 |
| ·mRNA分离与cDNA合成 | 第45-46页 |
| ·pcDNA3.1(+)-ATF4重组体酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·pcDNA3.1(+)-ATF4重组质粒转染细胞 | 第47-48页 |
| ·转染细胞RNA的提取及反转录 | 第48-49页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 第四部分:全文讨论及总结 | 第51-55页 |
| 1 讨论 | 第51-54页 |
| ·关于基因功能研究方法 | 第51-52页 |
| ·关于SNP和性状关联分析 | 第52页 |
| ·关于ATF4基因的表达分析 | 第52-53页 |
| ·关于研究启动子的作用及研究的意义 | 第53-54页 |
| ·关于真核表达载体的构建及验证 | 第54页 |
| 2 下一步的工作 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
