| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-22页 |
| ·Dll4-Notch 蛋白信号通道简介 | 第12-16页 |
| ·Notch 受体 | 第12页 |
| ·Dll4 配体 | 第12页 |
| ·Dll4-Notch 信号通路的激活 | 第12-13页 |
| ·Dll4 在血管生成中的作用 | 第13-14页 |
| ·Dll4 在肿瘤血管靶向治疗的应用 | 第14-16页 |
| ·杆状病毒作为哺乳动物基因传递载体 | 第16-19页 |
| ·杆状病毒简介 | 第16-17页 |
| ·杆状病毒作为基因转移载体 | 第17-18页 |
| ·杆状病毒诱导人体免疫激发 | 第18-19页 |
| ·实验目的及意义 | 第19-20页 |
| ·实验内容 | 第20-21页 |
| ·基本实验思路 | 第21-22页 |
| 第二章 相关基因及蛋白信息学数据 | 第22-25页 |
| ·信息学工具 | 第22页 |
| ·基因及蛋白信息 | 第22-25页 |
| ·Dll4 基因及蛋白信息 | 第22-23页 |
| ·VSVG 基因及蛋白序列 | 第23页 |
| ·DAF 基因序列 | 第23-24页 |
| ·SP 基因序列和 TM 基因序列 | 第24页 |
| ·CMV-IE 启动子序列 | 第24-25页 |
| 第三章 家蚕杆状病毒 Bmgp64Dll4 的构建 | 第25-40页 |
| ·材料、仪器和试剂 | 第25-27页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·仪器和试剂 | 第25-27页 |
| ·主要试剂配制 | 第25-27页 |
| ·方法 | 第27-36页 |
| ·重组杆状病毒转座载体 pFastBac1gp64Dll4 的构建 | 第27-31页 |
| ·从野生杆状病毒基因组中 PCR 扩增 gp64 信号肽（SP）和跨膜区（TM） | 第27-28页 |
| ·Dll4 基因 PCR 扩增 | 第28-29页 |
| ·SP-Dll4-TM 用重叠 PCR 连接而成 | 第29-30页 |
| ·pFastbBac1 载体及 SP-Dll4-TM 片段双酶切并连接 | 第30-31页 |
| ·E. coli TG1 感受态细胞的制备(CaCl2法) | 第31页 |
| ·连接产物转化 | 第31页 |
| ·挑斑和质粒提取 | 第31页 |
| ·重组质粒 pFastBacgp64Dll4 的鉴定 | 第31页 |
| ·重组质粒 Bacmid-gp64Dll4 的构建与鉴定 | 第31-33页 |
| ·DH10Bac 感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·重组质粒 pFastBac1-gp64Dll4 的转化 | 第32页 |
| ·阳性克隆的挑选及重组 Bacmid-gp64Dll4 质粒 DNA 的提取 | 第32页 |
| ·重组 Bacmid-gp64Dll4 质粒 DNA 的提取 | 第32页 |
| ·重组质粒 Bacmid-gp64Dll4 的 PCR 鉴定 | 第32-33页 |
| ·杆状病毒 Bmgp64Dll4 的获得 | 第33-36页 |
| ·家蚕卵巢细胞（BmN）的培养 | 第33页 |
| ·重组质粒 Bacmidgp64Dll4 转染家蚕 BmN 细胞 | 第33-34页 |
| ·重组杆状病毒 Bmgp64Dll4 基因组的提取及 PCR 鉴定 | 第34页 |
| ·Bmgp64Dll4 发病 BmN 细胞 western Bloting 鉴定 | 第34-35页 |
| ·细胞免疫荧光检测 | 第35-36页 |
| ·实验结果 | 第36-39页 |
| ·pFastBac1gp64Dll4 载体鉴定 | 第36页 |
| ·Bacmidgp64Dll4 PCR 鉴定 | 第36-37页 |
| ·Bmgp64Dll4 病毒基因组 PCR 鉴定 | 第37页 |
| ·Bmgp64Dll4 发病家蚕细胞 Western Bloting 鉴定 | 第37-38页 |
| ·病毒 Bmgp64Dll4 的 Dll4 蛋白在 BmN 细胞的免疫荧光检测鉴定 | 第38页 |
| ·病毒 Bmgp64Dll4 超速离心脱糖后 PEGE 及 Western Blotting | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 杆状病毒 Bmgp64Dll4 免疫后对小鼠后对肺癌的抑制作用 | 第40-50页 |
| ·材料、仪器和试剂 | 第40-42页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·仪器和试剂 | 第40-42页 |
| ·细胞免疫荧光试剂 | 第40-41页 |
| ·Western blot 试剂 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-45页 |
| ·注射用病毒的样品的制备 | 第42-43页 |
| ·杆状病毒 Bmgp64Dll4 的扩增 | 第42页 |
| ·杆状病毒 Bmgp64Dll4 的收集 | 第42页 |
| ·杆状病毒纯化 | 第42-43页 |
| ·蛋白定量 | 第43页 |
| ·小鼠肿瘤模型的构建 | 第43-44页 |
| ·C57BL/6 小鼠病毒免疫 | 第44页 |
| ·小鼠肿瘤接种 | 第44-45页 |
| ·小鼠血液抗体表达水平检测 | 第45页 |
| ·小鼠血液中 Dll4 抗体水平检测 | 第45页 |
| ·实验结果 | 第45-49页 |
| ·蛋白定量结果 | 第45页 |
| ·小鼠血液中 Dll4 抗体水平检测 | 第45-46页 |
| ·小鼠肿瘤体积生长情况 | 第46-47页 |
| ·疫苗对小鼠体重的影响 | 第47-49页 |
| ·结论 | 第49-50页 |
| 第五章 基因传递重组家蚕杆状病毒病毒构建 | 第50-66页 |
| ·材料、仪器和试剂 | 第50页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·仪器和试剂 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-60页 |
| ·杆状病毒 BmNPV-CMV-Dll4-VSVG 的构建及获得 | 第50-55页 |
| ·PCR 扩增信号肽(SP)和跨膜区（TM） | 第50-51页 |
| ·VSVG 基因的扩增 | 第51-52页 |
| ·信号肽 SP、跨膜区和 VSVG 基因的重叠 | 第52-53页 |
| ·CMV-IE 启动子的获得 | 第53-54页 |
| ·Dll4 基因获得 | 第54页 |
| ·载体 pFastBacDual-CMV-IE 的构建 | 第54-55页 |
| ·重组载体 pFastBacDual-CMV-VSVG 的获得 | 第55页 |
| ·重组载体 pFastBacDual-CMV-VSVG-Dll4 的获得 | 第55页 |
| ·重组杆状病毒转座载体 pFastBacDaul-CMV-EGFP-VSVG 的构建 | 第55-56页 |
| ·将 EGFP 片段连接到 PFastBac-CMV-VSG 上 | 第56页 |
| ·杆状病毒 BmNPV-CMV-Dll4-DAF 的构建及获得 | 第56-59页 |
| ·PCR 扩增信号肽(SP)和跨膜区（TM） | 第56-57页 |
| ·DAF 蛋白从质粒 cDNA 上 PCR 扩增获得，引物为 | 第57-58页 |
| ·pFastBacDual-DAF 的构建 | 第58-59页 |
| ·重组载体 pFastBacDual-CMV-DAF 的获得 | 第59页 |
| ·载体 pFastBacDual-CMV-DAF-Dll4 的获得 | 第59页 |
| ·重组杆状病毒转座载体 pFastBacDaul-CMV-EGFP-DAF 的构建 | 第59页 |
| ·杆状病毒转座及转染步骤参照第三章，不再赘述 | 第59-60页 |
| ·实验结果 | 第60-65页 |
| ·BmNPV-CMVIE-Dll4-VSVG 的构建 | 第60-63页 |
| ·pFastBacDual-CMVIE 载体构建鉴定图 | 第60页 |
| ·pFastBacDual-CMVIE-VSVG 的鉴定图 | 第60-61页 |
| ·pFastBacDual-CMVIE-VSVG-Dll4 的鉴定图 | 第61页 |
| ·pFastBacDual-CMVIE-VSVG-EGFP 的 | 第61-62页 |
| ·重组 BacmidCMVIE-VSVG-Dll4 的鉴定 | 第62页 |
| ·家蚕杆状病毒 BmCMVIE-VSVG-Dll4 的获得 | 第62-63页 |
| ·家蚕杆状病毒 BmCMVIE-DAF-Dll4 的构建 | 第63-64页 |
| ·重组 BacmidCMVIE-DAF-Dll4 的鉴定 | 第63页 |
| ·重组 BacmidCMVIE-DAF-Dll4 的鉴定 | 第63-64页 |
| ·家蚕杆状病毒 BmCMVIE-DAF-Dll4 的鉴定 | 第64页 |
| ·家蚕杆状病毒 BmCMVIE-DAF-Dll4 发病细胞免疫荧光 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| 第六章 重组杆状病毒转导 Hek293T 细胞，免疫荧光检测蛋白表达 | 第66-73页 |
| ·材料、实验仪器和试剂 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-69页 |
| ·细胞培养 | 第66页 |
| ·细胞复苏 | 第66页 |
| ·细胞扩增 | 第66页 |
| ·病毒浓缩 | 第66-67页 |
| ·病毒滴度测定 | 第67-68页 |
| ·病毒基因组的提取 | 第67页 |
| ·用 Real-Time PCR 测定病毒滴度 | 第67-68页 |
| ·病毒转导 | 第68-69页 |
| ·结果 | 第69-72页 |
| ·Realtime PCR 病毒滴度测定结果 | 第69-70页 |
| ·BmCMVIE-DAF-EGFP 转导 Hek293T 细胞 | 第70页 |
| ·家蚕杆状病毒 BmCMVIE-VSVG-Dll4 转导 Hek293T 细胞免疫荧光 | 第70-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
