| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 腺相关病毒在基因治疗领域的研究进展 | 第15-24页 |
| 前言 | 第15页 |
| ·腺相关病毒的生物学特征 | 第15-17页 |
| ·AAV 血清型与组织感染嗜性 | 第17-19页 |
| ·病毒衣壳蛋白的改造 | 第19-22页 |
| ·卵巢癌细胞的研究现状 | 第22-23页 |
| ·本课题的研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 嵌合型质粒文库的构建 | 第24-48页 |
| ·实验器材 | 第24-27页 |
| ·实验仪器 | 第24页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·实验试剂 | 第24-25页 |
| ·引物合成 | 第25-26页 |
| ·实验试剂的配制 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-38页 |
| ·碱裂解法小量抽提质粒 DNA | 第27-28页 |
| ·PCR 扩增 AAV2/1-2/9 cap 基因 | 第28-30页 |
| ·琼脂糖凝胶回收 DNA | 第30页 |
| ·DNaseI 酶随机切割 DNA 片段 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶回收随机长度 DNA 片段 | 第31页 |
| ·AAV1/2-AAV1/9 cap DNA Shuffling PCR | 第31-33页 |
| ·Shuffling PCR 产物直接回收 | 第33页 |
| ·载体 pAdBII 的大量抽提 | 第33-34页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·构建 pAdB-RC 质粒文库 | 第35-37页 |
| ·探索构建 pAdB-RC 质粒亚库 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-46页 |
| ·AAV2/1-2/9（除 AAV2/6）cap PCR 电泳结果 | 第38-39页 |
| ·AAV2/6 Cap PCR 电泳结果 | 第39页 |
| ·DNaseI 酶随机酶切 AAV1-9 cap 基因电泳结果 | 第39-40页 |
| ·AAV1/2-AAV1/9 cap DNA Shuffling PCR 电泳结果 | 第40-41页 |
| ·双酶切载体电泳结果 | 第41-42页 |
| ·细菌电穿孔转化摸索结果 | 第42-43页 |
| ·质粒 pAdB-RC 鉴定 | 第43-45页 |
| ·pAdB-RC 质粒亚库建立的结果 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 嵌合型 AAV 病毒文库的构建及筛选 | 第48-66页 |
| ·实验器材 | 第48-50页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·实验仪器 | 第48-49页 |
| ·实验试剂的配制 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-58页 |
| ·细胞培养 | 第50-51页 |
| ·构建嵌合型 AAV 病毒文库 | 第51页 |
| ·MC-AAV 病毒滴度测定 | 第51-53页 |
| ·Ad35-EGFP 辅助病毒感染 SK-OV-3f 细胞的 MOI 的测定 | 第53页 |
| ·第 1 轮筛选靶向 SK-OV-3f 细胞的病毒 | 第53-54页 |
| ·第 2~5 轮筛选靶向 SK-OV-3f 细胞的病毒 | 第54页 |
| ·PCR 法检测筛选后的嵌合型病毒 | 第54-55页 |
| ·构建质粒 pAdB-mc | 第55-58页 |
| ·实验结果 | 第58-64页 |
| ·Ad35-EGFP 病毒辅助感染 MOI 的确定 | 第58-59页 |
| ·MC-AAV 病毒滴度测定的结果 | 第59-60页 |
| ·Ad35-EGFP 辅助病毒感染 SK-OV-3f 细胞的 MOI 的确定 | 第60-61页 |
| ·1~5 轮筛选靶向 SK-OV-3f 细胞的病毒的结果 | 第61-62页 |
| ·质粒 pAdB-mc 构建结果 | 第62-64页 |
| ·阳性克隆测序结果 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 新型靶向卵巢癌细胞的病毒的包装及感染能力的检测 | 第66-76页 |
| ·实验器材 | 第66-67页 |
| ·实验仪器 | 第66页 |
| ·实验试剂 | 第66页 |
| ·实验材料 | 第66-67页 |
| ·实验方法 | 第67-69页 |
| ·质粒 AAV2/1~AAV2/9 的大量抽提 | 第67页 |
| ·质粒 pAAV-EGFP 和质粒 pAdB-mc 的大量抽提 | 第67页 |
| ·包装重组病毒 | 第67-68页 |
| ·AAV-EGFP 病毒感染效率的检测 | 第68-69页 |
| ·新型嵌合型 qAAV-EGFP 病毒靶向能力的检测 | 第69页 |
| ·实验结果 | 第69-74页 |
| ·包装亲本型 AAV-EGFP 病毒的实验结果 | 第69-70页 |
| ·包装新型嵌合型 qAAV-EGFP 病毒的实验结果 | 第70-71页 |
| ·各种 AAV-EGFP 病毒感染 SK-OV-3f 细胞的结果 | 第71-73页 |
| ·嵌合型 qAAV-EGFP 病毒靶向实验的结果 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| 结论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
