| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一部分 JMJD2B在TSA诱导前列腺癌细胞LNCap凋亡过程中的作用及机制研究 | 第11-42页 |
| 引言 | 第13-20页 |
| 一. JMJD2 亚家族基因及其研究进展 | 第13-14页 |
| （一）JMJD2 亚家族成员 | 第13-14页 |
| （二）JMJD2 家族蛋白与肿瘤发生发展 | 第14页 |
| （三）JMJD2B基因及其功能研究 | 第14页 |
| 二、组蛋白去乙酰化酶抑制剂与肿瘤细胞凋亡 | 第14-19页 |
| （一）组蛋白去乙酰化酶抑制剂概述 | 第14-16页 |
| （二）组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA简介 | 第16-17页 |
| （三）细胞凋亡研究背景 | 第17-18页 |
| （四）细胞凋亡相关基因 | 第18-19页 |
| 三、本部分研究的内容与意义 | 第19-20页 |
| （一）立题依据 | 第19页 |
| （二）研究内容和意义 | 第19-20页 |
| 实验材料与方法 | 第20-32页 |
| 一、实验材料 | 第20-21页 |
| （一）质粒 | 第20页 |
| （二）抗体 | 第20页 |
| （三）siRNA及转染试剂的订购 | 第20页 |
| （四）哺乳动物细胞系 | 第20页 |
| （五）试剂 | 第20-21页 |
| （六）实验仪器 | 第21页 |
| 二、实验方法 | 第21-32页 |
| Ⅰ. 分子生物学实验方法 | 第21-26页 |
| （一）分子克隆 | 第21页 |
| （二）DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第21页 |
| （三）质粒大量制备的方法 | 第21-24页 |
| （四）哺乳动物细胞总RNA的提取和反转录 | 第24-25页 |
| （五）PCR和荧光实时定量（Real-time）PCR | 第25-26页 |
| Ⅱ. 细胞生物学实验方法 | 第26-31页 |
| （一）哺乳动物细胞系的培养 | 第26页 |
| （二）Western blotting检测 | 第26-28页 |
| （三）MTT法检测细胞增殖能力 | 第28页 |
| （四）流式细胞术检测细胞周期 | 第28页 |
| （五）流式细胞术检测细胞凋亡 | 第28-29页 |
| （六）免疫荧光 | 第29页 |
| （七）免疫共沉淀（coimmuno-precipitation assay, CoIP） | 第29-31页 |
| Ш、统计分析 | 第31-32页 |
| 实验结果与分析 | 第32-40页 |
| 一、组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导前列腺癌细胞LNCap凋亡过程中JMJD2B基因表达的变化 | 第32-33页 |
| 二、 TSA诱导肿瘤细胞凋亡过程中survivin蛋白水平降低依赖于JMJD2B的下调 | 第33-35页 |
| （一）TSA诱导肿瘤细胞凋亡过程中survivin蛋白水平降低 | 第33页 |
| （二）TSA诱导肿瘤细胞凋亡过程中survivin蛋白水平降低依赖于JMJD2B的下调 | 第33-34页 |
| （三）JMJD2B调控survivin蛋白的机制 | 第34-35页 |
| 三、 Cyclin B1 参与JMJD2B对survivin的调控，以及JMJD2B对Cyclin B1 蛋白的调控 | 第35-38页 |
| （一）干涉 JMJD2B对Cdc2 和Cyclin B1 的蛋白和mRNA的影响 | 第35-36页 |
| （二）JMJD2B影响Cyclin B1 蛋白的稳定性 | 第36-37页 |
| （三）JMJD2B蛋白与Cyclin B1 蛋白的结合情况 | 第37-38页 |
| 四、干涉JMJD2B对TSA诱导细胞凋亡的影响 | 第38-40页 |
| （一）TSA诱导前列腺癌细胞LNCap凋亡的验证 | 第38-39页 |
| （二）干涉JMJD2B促进TSA诱导细胞凋亡 | 第39-40页 |
| 讨论 | 第40-42页 |
| 一. 干涉JMJD2B抑制survivin通路，增强TSA诱导前列腺癌细胞的凋亡，部分抑制前列腺癌细胞的增殖 | 第40-41页 |
| 二. JMJD2B表达下调与组蛋白去乙酰化酶抑制剂作用机制的关系 | 第41-42页 |
| 第二部分 干涉RAD21 基因诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231 衰老的发现及其分子机制研究 | 第42-77页 |
| 前言 | 第44-49页 |
| 一、RAD21 基因家族简介 | 第44-45页 |
| （一）RAD21 家族成员与功能 | 第44页 |
| （二）RAD21 基因及其研究进展 | 第44-45页 |
| 二、细胞衰老与肿瘤 | 第45-47页 |
| （一）细胞衰老的介绍 | 第45-46页 |
| （二）衰老与肿瘤的研究进展 | 第46-47页 |
| 三、本部分研究的内容与意义 | 第47-49页 |
| （一）立题依据 | 第47-48页 |
| （二）研究内容和意义 | 第48-49页 |
| 实验材料与方法 | 第49-62页 |
| 一、实验材料 | 第49-50页 |
| （一）质粒 | 第49页 |
| （二）抗体 | 第49页 |
| （三）siRNA的订购 | 第49页 |
| （四）哺乳动物细胞系 | 第49-50页 |
| （五）试剂 | 第50页 |
| （六）实验仪器 | 第50页 |
| 二.实验方法 | 第50-62页 |
| Ⅰ. 分子生物学实验方法 | 第50-55页 |
| （一）分子克隆 | 第50页 |
| （二）DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第50-51页 |
| （三）质粒大量制备的方法 | 第51-53页 |
| （四）哺乳动物细胞总RNA的提取和反转录 | 第53-54页 |
| （五）PCR和荧光实时定量（Real-time）PCR | 第54-55页 |
| Ⅱ. 细胞生物学实验方法 | 第55-61页 |
| （一）哺乳动物细胞系的培养 | 第55页 |
| （二）真核生物细胞的瞬时转染和荧光素酶报告基因检测 | 第55-56页 |
| （三）Western blotting检测 | 第56-58页 |
| （四）MTT法检测细胞增殖能力 | 第58-59页 |
| （五）衰老染色实验 | 第59页 |
| （六）免疫荧光 | 第59-60页 |
| （七）免疫共沉淀（coimmuno-precipitation assay, CoIP） | 第60-61页 |
| Ⅲ、统计分析 | 第61-62页 |
| 实验结果与分析 | 第62-74页 |
| 一. 干涉内源RAD21 基因的表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231 的影响 | 第62-64页 |
| （一）RAD21 siRNA干涉效果的验证 | 第62页 |
| （二）干涉RAD21 抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231 的增殖及DNA合成 | 第62-63页 |
| （三）干涉RAD21 诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231 衰老相关的β-半乳糖苷酶活性提高，细胞核内形成特殊异染色质凝集现象 | 第63-64页 |
| 二、p21 和pRb蛋白参与干涉RAD21 诱导的细胞衰老 | 第64-66页 |
| （一）干涉RAD21 上调p21 表达，下调pRb的磷酸化水平 | 第64-65页 |
| （二）干涉p21 和pRb蛋白对干涉RAD21 诱导细胞衰老的影响 | 第65-66页 |
| 三、c-Myc对干涉RAD21 诱导衰老中pRb-E2F信号通路的影响 | 第66-69页 |
| （一）干涉RAD21 下调pRb-E2F通路下游靶基因 | 第66-67页 |
| （二）c-Myc参与干涉RAD21 对pRb-E2F通路的调控 | 第67-68页 |
| （三）干涉RAD21 下调c-Myc下游pRb调控因子CDK4 的表达水平 | 第68-69页 |
| （四）干涉RAD21 降低c-Myc下游效应子CDK4 的启动子活性 | 第69页 |
| 四、PML参与干涉RAD21 对c-Myc调控的分子机制 | 第69-71页 |
| （一）蛋白酶体抑制剂MG-132 抑制了干涉RAD21 诱发的c-Myc蛋白降解 | 第70页 |
| （二）PML小体和c-Myc在干涉RAD21 诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231 衰老过程中的结合情况 | 第70-71页 |
| 五、p38MAPK信号途径参与干涉RAD21 诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231 的衰老作用 | 第71-74页 |
| （一）干涉RAD21 促进p38 MAPK蛋白磷酸化水平增加，而不影响ERK1/2 的磷酸化水平 | 第71-72页 |
| （二）阻断p38MAPK信号途径可以部分抵制干涉RAD21 诱导的细胞衰老 | 第72-74页 |
| 讨论 | 第74-77页 |
| 一、RAD21 参与肿瘤细胞衰老事件的探讨 | 第74-75页 |
| 二、pRb蛋白和p21 蛋白参与干涉RAD21 诱导MDA-MB-231 细胞衰老 | 第75页 |
| 三、p38MAPK信号转导途径参与干涉RAD21 诱导MDA-MB-231 细胞衰老 | 第75-77页 |
| 主要结论和创新点 | 第77-78页 |
| 一、主要结论 | 第77页 |
| 二、主要创新点 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 附录 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第88页 |
