| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 中英文对照及英文缩写词表 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-29页 |
| ·人参皂苷的研究进展 | 第13-21页 |
| ·人参皂苷的结构和分类 | 第13-16页 |
| ·人参皂苷的理化性质 | 第16页 |
| ·人参皂苷的分析 | 第16-19页 |
| ·人参皂苷的药理学活性 | 第19-21页 |
| ·人参皂苷的生物转化 | 第21-23页 |
| ·研究目标及研究意义 | 第23-25页 |
| ·立题依据和背景 | 第23-24页 |
| ·研究目标 | 第24页 |
| ·研究意义 | 第24-25页 |
| 参考文献 | 第25-29页 |
| 第二章 12 种商品糖苷酶对人参皂苷 Rb1 的转化 | 第29-48页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第29-30页 |
| ·试验材料 | 第29-30页 |
| ·实验试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-32页 |
| ·分析方法 | 第30-31页 |
| ·人参二醇型皂苷混合物及各单体皂苷的制备 | 第31-32页 |
| ·十二种商品糖苷水解酶的酶活测定 | 第32页 |
| ·十二种商品水解酶对人参二醇型皂苷混合物及 Rb1 的转化 | 第32页 |
| ·转化产物的分析与鉴定 | 第32页 |
| ·实验结果分析与讨论 | 第32-45页 |
| ·人参二醇型皂苷混合物和各单体皂苷的制备与分析 | 第32-35页 |
| ·十二种商品糖类水解酶对人参二醇型皂苷混合物及 Rb1 单体的转化 | 第35-41页 |
| ·十二种商品糖类水解酶的酶活测定及对 Rb1 的水解效率研究 | 第41-42页 |
| ·转化产物的鉴定 | 第42-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·总结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-48页 |
| 第三章 草酸青霉对人参二醇型皂苷转化的研究 | 第48-66页 |
| ·材料、试剂与仪器 | 第48页 |
| ·试验材料 | 第48页 |
| ·试剂和仪器 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-51页 |
| ·培养基与溶液的配制 | 第48-49页 |
| ·人参皂苷水解菌种的筛选 | 第49页 |
| ·菌种 sp.68 的鉴定 | 第49-50页 |
| ·菌种 sp.68 转化人参二醇型皂苷混合物的研究 | 第50页 |
| ·菌种 sp.68 的胞外酶的制备 | 第50页 |
| ·菌种 sp.68 的胞外糖苷酶用于转化人参皂苷 | 第50-51页 |
| ·菌种 sp.68 转化人参皂苷的产物制备与鉴定 | 第51页 |
| ·菌种 sp.68 的胞外糖苷酶转化人参皂苷制备 C-K 的优化 | 第51页 |
| ·结果分析 | 第51-62页 |
| ·人参皂苷转化菌株的筛选 | 第51-52页 |
| ·菌种 sp.68 的分子生物学鉴定 | 第52-53页 |
| ·草酸青霉胞外糖苷酶的部分纯化 | 第53-54页 |
| ·草酸青霉胞外酶液转化人参二醇型皂苷混合物 | 第54页 |
| ·草酸青霉胞外酶液对各单体人参皂苷的转化 | 第54-55页 |
| ·草酸青霉胞外酶液转化人参单体皂苷的产物制备与鉴定 | 第55-61页 |
| ·草酸青霉胞外酶转化人参皂苷制备 C-K 的条件优化 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| ·结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-66页 |
| 第四章 草酸青霉胞外糖苷酶的分离纯化 | 第66-83页 |
| ·材料、试剂与仪器 | 第66页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·试剂与仪器 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-69页 |
| ·试剂配制 | 第66-67页 |
| ·草酸青霉的活化及培养 | 第67页 |
| ·草酸青霉的胞外糖苷酶的分离纯化 | 第67-68页 |
| ·GH1 的分离纯化 | 第68页 |
| ·GH3 的分离纯化 | 第68-69页 |
| ·纯化过程监测 | 第69页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 的纯度检测 | 第69页 |
| ·实验结果 | 第69-80页 |
| ·草酸青霉中胞外糖苷酶的初步纯化 | 第69-72页 |
| ·GH1 的分离纯化 | 第72-75页 |
| ·GH3 的纯化 | 第75-80页 |
| ·讨论 | 第80-81页 |
| ·结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-83页 |
| 第五章 草酸青霉胞外糖苷酶的性质研究 | 第83-99页 |
| ·引言 | 第83-84页 |
| ·β -葡萄糖苷酶的分类 | 第83页 |
| ·β -葡萄糖苷酶的活性中心及催化反应的模型 | 第83-84页 |
| ·β -葡萄糖苷酶的分子特征 | 第84页 |
| ·材料、试剂与仪器 | 第84页 |
| ·实验方法 | 第84-87页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 的分子量测定 | 第84-85页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 等电点的测定 | 第85页 |
| ·糖蛋白检测 | 第85页 |
| ·最适 pH 测定 | 第85-86页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 的 pH 稳定性 | 第86页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 的最适反应温度 | 第86页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 的温度稳定性 | 第86页 |
| ·金属离子和抑制剂对 GH1、GH3-1 和 GH3-2 酶活性的影响 | 第86页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 动力学参数的测定 | 第86-87页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 的底物专一性测定 | 第87页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 对人参皂苷水解的时间过程 | 第87页 |
| ·人参皂苷水解产物的分离和鉴定 | 第87页 |
| ·结果分析与讨论 | 第87-95页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 的分子量分析 | 第87-88页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 的等电点测定 | 第88-89页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 的糖蛋白检测 | 第89-90页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 的最适 pH 和 pH 稳定性 | 第90页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 的最适温度和温度稳定性 | 第90-91页 |
| ·金属离子和抑制剂对 GH1、GH3-1 和 GH3-2 酶活的影响 | 第91-92页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 的底物专一性分析 | 第92-93页 |
| ·GH1、GH3-1 和 GH3-2 的动力学常数测定 | 第93-94页 |
| ·GH1 对人参皂苷的转化及转化产物鉴定 | 第94页 |
| ·GH3-1 和 GH3-2 对人参二醇型皂苷的水解 | 第94-95页 |
| ·讨论 | 第95-96页 |
| ·结论 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-99页 |
| 第六章 粪肥杆菌中糖苷水解酶的克隆、表达、纯化与性质研究 | 第99-145页 |
| ·引言 | 第99-101页 |
| ·糖苷水解酶家族 1 | 第99-100页 |
| ·糖苷水解酶家族 3 | 第100页 |
| ·糖苷水解酶家族 31 | 第100页 |
| ·糖苷水解酶家族 42 | 第100-101页 |
| ·粪肥杆菌中糖苷水解酶的研究 | 第101页 |
| ·材料、试剂与仪器 | 第101-102页 |
| ·实验材料 | 第101页 |
| ·主要生化试剂 | 第101-102页 |
| ·实验仪器 | 第102页 |
| ·实验方法 | 第102-111页 |
| ·培养基的配制 | 第102-103页 |
| ·大肠杆菌 AD202 感受态细胞的制备 | 第103页 |
| ·质粒 pCW 的提取 | 第103页 |
| ·粪肥杆菌中糖苷水解酶的克隆 | 第103-107页 |
| ·C.fimi 中糖苷水解酶的表达 | 第107页 |
| ·细胞破碎及目的蛋白的提取 | 第107页 |
| ·Western blot 检测各重组蛋白的 His6-tag | 第107-108页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第108-109页 |
| ·纯化过程目的蛋白的检测 | 第109页 |
| ·重组糖苷酶对 pNP 底物的水解 | 第109页 |
| ·重组糖苷酶对人参皂苷的水解 | 第109-110页 |
| ·糖苷酶对不同二糖和寡糖的水解 | 第110页 |
| ·各重组酶的最适 pH 测定 | 第110-111页 |
| ·各重组酶的最适温度测定 | 第111页 |
| ·各重组酶的动力学参数研究 | 第111页 |
| ·结果分析与讨论 | 第111-139页 |
| ·粪肥杆菌中糖苷酶的克隆 | 第111页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第111-112页 |
| ·酶切、连接及转化 | 第112页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第112页 |
| ·家族 3 的糖苷酶的表达、纯化与性质研究 | 第112-118页 |
| ·家族 3 的糖苷水解酶对 pNP-人工糖苷的水解 | 第118-119页 |
| ·家族 3 的糖苷水解酶对二糖、寡糖的水解 | 第119-126页 |
| ·家族 3 的糖苷水解酶对 pNP 底物的动力学常数 | 第126页 |
| ·家族 3 的糖苷水解酶的最适 pH 和最适温度研究 | 第126-127页 |
| ·家族 1 的糖苷酶 cfi-10 的表达、纯化与性质研究 | 第127-132页 |
| ·家族 31 的糖苷水解酶 cfi-02 的表达、纯化与性质研究 | 第132-134页 |
| ·家族 42 的糖苷水解酶 cfi-04 的表达、纯化和性质研究 | 第134-137页 |
| ·粪肥杆菌中糖苷水解酶对人参皂苷的转化 | 第137-138页 |
| ·草酸青霉和粪肥杆菌中糖苷水解酶的比较 | 第138-139页 |
| ·讨论 | 第139-142页 |
| ·结论 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-145页 |
| 论文总结 | 第145-147页 |
| 附录 | 第147-153页 |
| 致谢 | 第153-154页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第154页 |
