| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-22页 |
| 1 锌指蛋白的研究进展 | 第12-16页 |
| ·锌指蛋白的分类 | 第12-14页 |
| ·锌指蛋白调控基因转录的功能 | 第14-16页 |
| 2 酵母双杂交技术的进展及其应用 | 第16-22页 |
| ·酵母双杂交的原理 | 第17-18页 |
| ·酵母双杂交技术的进展 | 第18-20页 |
| ·酵母双杂交系统应用 | 第20-21页 |
| ·展望 | 第21-22页 |
| 第二章 酵母双杂交筛选与 ZBTB8A 蛋白相互作用的蛋白 | 第22-47页 |
| 1 实验材料 | 第23-26页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·酵母培养基 | 第24页 |
| ·氨基酸 | 第24-25页 |
| ·分子生物学工具酶 | 第25页 |
| ·分子生物学试剂盒 | 第25页 |
| ·抗体 | 第25页 |
| ·仪器 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-40页 |
| ·pGBKT7-ZBTB8A 载体构建 | 第26-28页 |
| ·诱饵蛋白质在酵母中的表达 | 第28-30页 |
| ·构建于 AD 载体的 cDNA 文库的扩增 | 第30-31页 |
| ·诱饵蛋白自身激活报道基因的活性检测——pGBKT7-ZBTB8A 与pGADT7 小规模共转化酵母 AH109 | 第31-32页 |
| ·酵母双杂交筛选与 ZBTB8A 相互作用蛋白——文库质粒大规模转化已携带诱饵质粒的酵母 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第33-35页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第35页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第35页 |
| ·蛋白相互作用的验证——pGBKT7-ZBTB8A 与 pACT2-Y 小规模共转化酵母 | 第35-36页 |
| ·测序及序列比对 | 第36-37页 |
| ·酵母双杂交筛选过程中相关培养基和试剂的配制 | 第37-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-46页 |
| ·诱饵表达载体的构建和表达 | 第40-41页 |
| ·诱饵蛋白质在酵母细胞中的表达鉴定 | 第41-42页 |
| ·pGBKT7-ZBTB8A 自身转录激活活性的检测 | 第42页 |
| ·酵母双杂交筛选初期结果 | 第42-43页 |
| ·抽提酵母质粒并转化大肠杆菌 | 第43-44页 |
| ·回转验证 | 第44页 |
| ·测序比对结果 | 第44-46页 |
| 4 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 哺乳动物体内相互作用的检测 | 第47-58页 |
| 1 实验材料 | 第47-48页 |
| ·菌株、细胞和质粒 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·细胞培养所需试剂 | 第47页 |
| ·细胞转染所需试剂 | 第47页 |
| ·细胞裂解液 | 第47页 |
| ·抗体 | 第47-48页 |
| ·蛋白酶抑制剂 | 第48页 |
| ·仪器 | 第48页 |
| 2 实验方法 | 第48-51页 |
| ·pCMV-Myc-SMARCB1 载体构建 | 第48页 |
| ·pCMV-GST-ZBTB8A 及其截短载体的构建 | 第48-50页 |
| ·细胞培养与传代 | 第50页 |
| ·哺乳动物 pull-down 实验 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-55页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第51-53页 |
| ·重组质粒的表达检测 | 第53-54页 |
| ·哺乳动物 pull-down 实验结果 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 第四章 ZBTB6 基因的克隆及细胞亚定位分析 | 第58-67页 |
| 1 材料与试剂 | 第58-60页 |
| ·生物学软件与数据库 | 第58页 |
| ·实验试剂 | 第58-59页 |
| ·主要仪器设备 | 第59页 |
| ·实验所需试剂的配置 | 第59-60页 |
| 2 实验方法 | 第60-63页 |
| ·基本实验方法 | 第60页 |
| ·PCR 克隆 ZBTB6 基因 | 第60-61页 |
| ·ZBTB6 系列截短变体的 pEGFP-C1 重组质粒的构建 | 第61-63页 |
| ·ZBTB6 蛋白的亚细胞定位分析 | 第63页 |
| 3 实验结果和分析 | 第63-65页 |
| ·RT-PCR 扩增 ZBTB6 基因 | 第63-64页 |
| ·pEGFP- ZBTB6 重组质粒的构建与鉴定 | 第64-65页 |
| ·ZBTB6 蛋白的亚细胞定位分析 | 第65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 第五章 ZBTB6 有效干扰载体的鉴定 | 第67-72页 |
| 1 材料与试剂 | 第67-68页 |
| ·实验试剂 | 第67页 |
| ·主要仪器设备 | 第67-68页 |
| ·实验所需试剂的配置 | 第68页 |
| 2 实验方法 | 第68-70页 |
| ·ZBTB6 干扰表达载体的获得 | 第68-69页 |
| ·有效 ZBTB6 干扰载体的鉴定 | 第69-70页 |
| 3 实验结果和分析 | 第70页 |
| ·RT-PCR 鉴定有效的 ZBTB6 干扰载体 | 第70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| 第六章 总结与展望 | 第72-74页 |
| 1 总结 | 第72页 |
| 2 展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-85页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
