| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 第1章 引言 | 第14-25页 |
| ·昆虫中肠围食膜的结构和功能 | 第14-15页 |
| ·围食膜蛋白的种类及其特性 | 第15-20页 |
| ·昆虫肠粘蛋白(ⅡM) | 第17-20页 |
| ·几丁质结合蛋白 | 第20页 |
| ·其它围食膜蛋白 | 第20页 |
| ·围食膜的形成机理及破坏机制 | 第20-23页 |
| ·cDNA文库——研究新基因的有效工具 | 第23-24页 |
| ·cDNA文库简介 | 第23页 |
| ·全长cDNA文库 | 第23-24页 |
| ·昆虫中肠cDNA文库的构建 | 第24页 |
| ·本研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 第2章 甜菜夜蛾和棉铃虫中肠cDNA表达文库的构建 | 第25-38页 |
| ·材料与方法 | 第25-32页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·方法 | 第27-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-35页 |
| ·总RNA的提取 | 第32-33页 |
| ·mRNA的分离纯化 | 第33页 |
| ·cDNA第一链、第二链的合成 | 第33-34页 |
| ·cDNA分级分离及定量 | 第34-35页 |
| ·文库的容量及重组率 | 第35页 |
| ·PCR鉴定文库插入片断大小 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| ·高质量的RNA | 第35-36页 |
| ·关于载体 | 第36页 |
| ·文库质量 | 第36-37页 |
| ·文库构建策略 | 第37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 第3章 甜菜夜蛾围食膜蛋白的筛选 | 第38-62页 |
| ·材料与方法 | 第38-41页 |
| ·供试昆虫 | 第38页 |
| ·抗体 | 第38-39页 |
| ·缓冲液 | 第39-40页 |
| ·围食膜的制备 | 第40页 |
| ·甜菜夜蛾五龄幼虫围食膜蛋白抗原及抗体的制备 | 第40页 |
| ·围食膜蛋白的检测(过碘酸-希夫显色法) | 第40页 |
| ·Western Blot | 第40-41页 |
| ·cDNA文库的免疫筛选 | 第41页 |
| ·cDNA序列分析 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-54页 |
| ·围食膜蛋白组成分析 | 第41-42页 |
| ·甜菜夜蛾围食膜蛋白抗体检测 | 第42-43页 |
| ·利用粉纹夜蛾粘蛋白抗体筛选甜菜夜蛾中肠cDNA文库 | 第43-50页 |
| ·利用粉纹夜蛾围食膜蛋白总抗体筛选甜菜夜蛾中肠cDNA文库 | 第50-51页 |
| ·利用粉纹夜蛾粘蛋白抗体和粉纹夜蛾围食膜蛋白总抗体筛选甜菜夜蛾中肠cDNA文库 | 第51-54页 |
| ·讨论 | 第54-60页 |
| ·甜菜夜蛾围食膜蛋白的组成 | 第54-55页 |
| ·甜菜夜蛾肠粘蛋白的结构特征 | 第55-58页 |
| ·全长围食膜蛋白基因的克隆和表达 | 第58-60页 |
| ·文库筛选 | 第60页 |
| ·小结 | 第60-62页 |
| 第4章 甜菜夜蛾围食膜蛋白SeCBP66的分离鉴定 | 第62-86页 |
| ·材料与方法 | 第62-70页 |
| ·供试昆虫 | 第62页 |
| ·昆虫细胞及真核基因表达系统 | 第62页 |
| ·菌株和质粒 | 第62-63页 |
| ·cDNA文库的筛选 | 第63页 |
| ·序列分析 | 第63页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第63页 |
| ·原核重组表达载体的构建 | 第63-65页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第65页 |
| ·重组子的筛选与阳性克隆的鉴定 | 第65-66页 |
| ·重组子的诱导表达及Western Blot鉴定 | 第66页 |
| ·cbdl基因的克隆和表达 | 第66页 |
| ·昆虫细胞培养基的配制 | 第66页 |
| ·细胞培养方法 | 第66-67页 |
| ·表达SeCBP66重组杆状病毒的构建 | 第67-68页 |
| ·表达CBDl重组杆状病毒的构建 | 第68页 |
| ·转染(磷酸钙法) | 第68-69页 |
| ·空斑实验 | 第69页 |
| ·再生几丁质(regeneratedchitin)的制备 | 第69页 |
| ·重组蛋白SeCBP66的几丁质结合活性 | 第69-70页 |
| ·结果与分析 | 第70-84页 |
| ·SeCBP66序列分析 | 第70-76页 |
| ·SeCBP66的原核表达 | 第76-80页 |
| ·在昆虫杆状病毒系统表达SeCBP66和CBDl | 第80-83页 |
| ·SeCBP66蛋白的几丁质结合活性 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-85页 |
| ·小结 | 第85-86页 |
| 第5章 甜菜夜蛾羧酸酯酶SeCl的分离鉴定 | 第86-98页 |
| ·材料与方法 | 第86-87页 |
| ·材料 | 第86页 |
| ·方法 | 第86-87页 |
| ·结果与分析 | 第87-95页 |
| ·cDNA文库的筛选及SeCl基因序列分析 | 第87-88页 |
| ·SeCl与几种昆虫羧酸酯酶氨基酸序列的比较分析 | 第88页 |
| ·羧酸酯酶重组载体的构建和表达 | 第88-94页 |
| ·羧酸酯酶的真核表达 | 第94-95页 |
| ·羧酸酯酶的活性测定 | 第95页 |
| ·讨论 | 第95-97页 |
| ·小结 | 第97-98页 |
| 第6章 棉铃虫围食膜蛋白的筛选 | 第98-112页 |
| ·材料与方法 | 第98-99页 |
| ·供试昆虫 | 第98页 |
| ·抗体 | 第98页 |
| ·缓冲液及常规试剂 | 第98页 |
| ·围食膜蛋白的检测 | 第98页 |
| ·cDNA文库的免疫筛选及序列分析 | 第98-99页 |
| ·结果与分析 | 第99-110页 |
| ·利用粉纹夜蛾肠粘蛋白抗体筛选棉铃虫中肠cDNA文库 | 第99-100页 |
| ·利用粉纹夜蛾围食膜总蛋白抗体筛选棉铃虫中肠cDNA文库 | 第100-110页 |
| ·利用甜菜夜蛾总围食膜蛋白抗体筛选棉铃虫中肠cDNA文库 | 第110页 |
| ·讨论 | 第110页 |
| ·小结 | 第110-112页 |
| 第7章 棉铃虫肠粘蛋白HaⅡM86的分离鉴定 | 第112-129页 |
| ·材料与方法 | 第112-114页 |
| ·供试昆虫及细胞系 | 第112页 |
| ·cDNA文库的筛选及序列分析 | 第112页 |
| ·原核重组表达载体的构建 | 第112页 |
| ·重组子的鉴定,诱导表达及Western Blot鉴定 | 第112-113页 |
| ·利用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达肠粘蛋白HaⅡM86 | 第113页 |
| ·重组病毒HaⅡM86的几丁质结合活性以及在不同试剂中的离解性 | 第113页 |
| ·HaⅡM86特异抗体的制备 | 第113-114页 |
| ·棉铃虫(H.armigera)幼虫中HaⅡM86蛋白的定位 | 第114页 |
| ·经昆虫杆状病毒增效蛋白(Enhancin)处理的HaⅡM86蛋白的检测 | 第114页 |
| ·结果与分析 | 第114-123页 |
| ·编码新围食膜蛋白HaⅡM86的cDNA的鉴定 | 第114-118页 |
| ·HaⅡM86蛋白的原核表达 | 第118-119页 |
| ·表达HaⅡM86重组杆状病毒的构建 | 第119-121页 |
| ·重组杆状病毒的表达 | 第121页 |
| ·棉铃虫(H.armigera)幼虫中HaⅡM86蛋白的定位 | 第121-122页 |
| ·重组病毒HaⅡM86的几丁质结合活性 | 第122-123页 |
| ·昆虫杆状病毒增效蛋白(Enhancin)对HaⅡM86蛋白的降解作用 | 第123页 |
| ·讨论 | 第123-128页 |
| ·棉铃虫肠粘蛋白HaⅡM86的序列特征 | 第123-126页 |
| ·HaⅡM86蛋白的表达 | 第126-127页 |
| ·发现意义 | 第127页 |
| ·从多克隆抗体库快速分离高特异性抗体的方法 | 第127-128页 |
| ·小结 | 第128-129页 |
| 全文结论 | 第129-131页 |
| 参考文献 | 第131-140页 |
| 附录 | 第140-142页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第142-145页 |
| 作者简历 | 第145-148页 |
| 致谢 | 第148页 |
