| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-27页 |
| ·NDV的一般生物学特性 | 第9-12页 |
| ·NDV的分类地位及粒子形态 | 第9页 |
| ·NDV的抵抗力 | 第9-10页 |
| ·NDV的生物学活性 | 第10-11页 |
| ·NDV的血清型 | 第11页 |
| ·NDV的培养特性 | 第11-12页 |
| ·NDV的致病特性 | 第12页 |
| ·NDV的基因组与结构蛋白特征 | 第12-20页 |
| ·NDV的基因组结构 | 第12-13页 |
| ·NDV的结构蛋白特征 | 第13-20页 |
| ·NDV致病的分子基础 | 第20-22页 |
| ·NDV的分子生物学诊断技术 | 第22-24页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第22-23页 |
| ·核酸探针技术 | 第23页 |
| ·RNA指纹图谱 | 第23页 |
| ·RT-PCR技术 | 第23-24页 |
| ·NDV的基因分型与分子流行病学 | 第24-27页 |
| 2 引言 | 第27-28页 |
| 3 材料和方法 | 第28-41页 |
| ·NDV毒株 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-32页 |
| ·载体、菌株及工具酶 | 第32页 |
| ·鸡NDV的提纯 | 第32-33页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·病毒总RNA提取 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR扩增HN基因 | 第34页 |
| ·NDV HN基因克隆 | 第34-37页 |
| ·PCR产物回收 | 第34-35页 |
| ·回收DNA与T载体连接 | 第35页 |
| ·大肠杆菌JM109感受态的制备 | 第35页 |
| ·转化 | 第35页 |
| ·阳性转化子的筛选与鉴定 | 第35-37页 |
| ·序列测定与分析 | 第37页 |
| ·NDV HN主要抗原域基因片段的扩增 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增片段的鉴定 | 第38页 |
| ·纯化回收DNA片段 | 第38页 |
| ·重组表达载体pETHN的构建 | 第38-39页 |
| ·目的片段与pET-28a(+)表达载体的酶切回收 | 第38页 |
| ·目的片段与线性载体的连接 | 第38-39页 |
| ·目的片段与线性载体的连接产物的转化 | 第39页 |
| ·重组质粒pETHN的PCR鉴定和酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第40页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第40页 |
| ·表达产物的检测 | 第40-41页 |
| ·表达产物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳((SDS-PAGE) | 第40-41页 |
| ·半干式电转印 | 第41页 |
| ·Western blotting | 第41页 |
| 4 结果与分析 | 第41-50页 |
| ·鸡NDV HN基因的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| ·鸡NDV HN基因的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·鸡NDV Lasota毒株HN氨基酸序列分析 | 第43-45页 |
| ·NDV HN基因片段的PCR扩增结果 | 第45页 |
| ·重组阳性质粒pETHN的的构建及鉴定结果 | 第45-47页 |
| ·原核表达质粒pETHN的构建策略 | 第45页 |
| ·重组质粒pETHN的PCR鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组质粒pETHN的双酶切鉴定 | 第46页 |
| ·重组质粒pETHN的测序鉴定 | 第46-47页 |
| ·NDV HN在大肠埃希氏菌中的诱导表达表达产物的检测 | 第47-50页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳检测 | 第47-48页 |
| ·Western blotting检测 | 第48-50页 |
| 5 结论与讨论 | 第50-54页 |
| ·RT-PCR获取NDV HN基因 | 第50页 |
| ·病毒的复制与纯化 | 第50-51页 |
| ·克隆载体的选择 | 第51页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第51页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第51页 |
| ·HN主要抗原域的选择及其原核表达蛋白的作用 | 第51-52页 |
| ·影响外源基因在大肠杆菌中高效表达的因素 | 第52页 |
| ·高效融合表达载体pET-28a(+)的选择 | 第52页 |
| ·Western-bloting免疫印迹实验检测重组蛋白的特异性 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| Abstract | 第62-63页 |
