| 独创性声明 | 第1页 |
| 关于学位论文使用授权的说明 | 第3-4页 |
| 缩略语表 | 第4-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第10-26页 |
| 1 乳腺生物反应器 | 第10-16页 |
| ·乳腺生物反应器研究进展 | 第10-11页 |
| ·提高转基因表达策略 | 第11-16页 |
| 2 隔离子(insulator) | 第16-26页 |
| ·染色质隔离子的基本概念 | 第16页 |
| ·染色质隔离子及其结合蛋白 | 第16-20页 |
| ·隔离子与染色质结构域 | 第20-21页 |
| ·染色质隔离子的生物学功能 | 第21-23页 |
| ·染色质隔离子的生物学特性 | 第23-24页 |
| ·染色质隔离子在转基因中应用 | 第24-26页 |
| 实验部分 | 第26-66页 |
| 实验一 位点不依赖性乳腺表达载体pW-BLG-VP2 的构建 | 第26-41页 |
| 1 实验材料与设备 | 第27-29页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·酶及药品 | 第27页 |
| ·实验仪器 | 第27-28页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第28-29页 |
| 2 实验方法 | 第29-36页 |
| ·pWHERE2 v.01 质粒的改造 | 第29-34页 |
| ·乳腺表达元件BLG-VP2 的分离回收 | 第34-35页 |
| ·pW-BLG-VP2 的克隆 | 第35页 |
| ·pW-BLG-VP2 阳性克隆的筛选 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 实验二 有泌乳功能乳腺上皮细胞体系的筛选 | 第41-60页 |
| 1 实验材料与设备 | 第42-44页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·实验药品及激素、抗体 | 第42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42-43页 |
| ·溶液及培养基配置 | 第43-44页 |
| 2 实验方法 | 第44-50页 |
| ·细胞培养 | 第44-45页 |
| ·细胞诱导 | 第45-46页 |
| ·乳腺上皮细胞特征鉴定 | 第46页 |
| ·β-酪蛋白(β-casein)基因的表达检测 | 第46-50页 |
| 3 结果 | 第50-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 实验三 外源基因 VP2 在乳腺上皮细胞中表达结果的检测 | 第60-66页 |
| 1 实验材料与设备 | 第60-61页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·实验药品及激素、抗体 | 第60-61页 |
| ·主要仪器设备 | 第61页 |
| ·溶液及培养基配置 | 第61页 |
| 2 实验方法 | 第61-62页 |
| ·乳腺上皮细胞培养 | 第61页 |
| ·乳腺上皮细胞的转染操作 | 第61-62页 |
| ·乳腺上皮细胞的诱导 | 第62页 |
| ·外源基因 VP2 的表达检测 | 第62页 |
| 3 实验结果 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 致 谢 | 第72-73页 |
| 作 者 简 历 | 第73页 |