| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-14页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的和意义 | 第14-17页 |
| 第一章 疱疹病毒US4基因及其编码蛋白的研究进展 | 第14-17页 |
| 1. 疱疹病毒US4基因及其编码蛋白研究进展 | 第14-16页 |
| ·疱疹病毒US4基因及其编码蛋白的特点 | 第14页 |
| ·US4编码蛋白的作用 | 第14-15页 |
| ·影响趋化因子活性 | 第14页 |
| ·US4编码蛋白在调理细胞方面的作用 | 第14-15页 |
| ·US4编码蛋白与其它蛋白的相互作用 | 第15页 |
| ·US4编码蛋白与US3蛋白的相互作用 | 第15页 |
| ·US4编码蛋白与US8蛋白(gE)的相互作用 | 第15页 |
| ·展望 | 第15-16页 |
| 2. 选题目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二部分 试验研究 | 第17-54页 |
| 第二章 鸭瘟病毒US4基因的克隆及分子特性分析 | 第17-26页 |
| 1. 材料 | 第17页 |
| ·病毒、载体及细胞 | 第17页 |
| ·试剂 | 第17页 |
| 2. 方法 | 第17-18页 |
| ·US4基因 | 第17页 |
| ·US4基因的克隆和测序 | 第17-18页 |
| ·US4基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第18页 |
| 3. 结果 | 第18-23页 |
| ·DPV US4基因的克隆和测序 | 第18页 |
| ·US4基因编码蛋白的序列比对 | 第18页 |
| ·US4基因编码蛋白的分子特性分析 | 第18-23页 |
| ·氨基酸组成分析 | 第18-20页 |
| ·抗原位点预测 | 第20页 |
| ·二级结构与三级结构预测 | 第20-22页 |
| ·DPVgG的物理化学性质 | 第22-23页 |
| 4. 讨论 | 第23-26页 |
| ·进化关系分析 | 第24页 |
| ·序列的分子特性与功能预测 | 第24-26页 |
| 第三章 鸭瘟病毒US4基因的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第26-38页 |
| 1. 材料 | 第26-27页 |
| ·毒株、载体和细胞 | 第26页 |
| ·试验动物 | 第26页 |
| ·主要药品与试剂 | 第26页 |
| ·主要试剂的配制 | 第26页 |
| ·试验仪器 | 第26-27页 |
| 2. 方法 | 第27-30页 |
| ·DNA模板的制备 | 第27页 |
| ·鸭胚成纤维细胞(DEF)的制备 | 第27页 |
| ·鸭瘟病毒的培养及病毒DNA的提取 | 第27页 |
| ·重组表达质粒pET-32a(+)/Us4的构建 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA抽提 | 第27页 |
| ·目的基因和表达载体的双酶切 | 第27页 |
| ·连接 | 第27页 |
| ·连接载体转化感受态细胞 | 第27-28页 |
| ·转化菌落的鉴定和筛选 | 第28页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及鉴定 | 第28-29页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第28页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE鉴定 | 第28页 |
| ·表达条件的优化 | 第28-29页 |
| ·抗原的制备 | 第29页 |
| ·目的蛋白的大量诱导表达 | 第29页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第29页 |
| ·高免血清的制备 | 第29-30页 |
| ·抗原的准备及检查 | 第29页 |
| ·抗原的免疫及高免血清的制备 | 第29-30页 |
| ·琼扩实验测定抗体效价 | 第30页 |
| ·兔抗DPVgG高免血清中IgG的提取 | 第30页 |
| ·抗体纯化及纯度鉴定 | 第30页 |
| ·Western-blot | 第30页 |
| ·表达的融合蛋白的鉴定 | 第30页 |
| ·DPVgG抗血清特异性检测 | 第30页 |
| 3. 结果 | 第30-36页 |
| ·重组表达质粒pET-32a(+)/US4的构建 | 第30页 |
| ·US4基因的表达及表达形式分析 | 第30-32页 |
| ·表达条件的优化 | 第32-33页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第32页 |
| ·诱导温度条件的优化 | 第32-33页 |
| ·诱导时间的优化 | 第33页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| ·琼扩实验测定抗体效价 | 第34页 |
| ·兔抗gG IgG的纯化及SDS-PAGE鉴定 | 第34-35页 |
| ·Western-blot检测 | 第35-36页 |
| ·表达的融合蛋白的鉴定 | 第35-36页 |
| ·抗体特异性检测 | 第36页 |
| 4. 讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 鸭瘟病毒US4截段基因原核表达及表达蛋白作为抗原建立间接ELISA检测鸭瘟病毒抗体 | 第38-50页 |
| 1. 材料 | 第38-39页 |
| ·原核表达及抗原性分析 | 第38页 |
| ·血清 | 第38页 |
| ·ELISA相关溶液 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| 2. 方法 | 第39-41页 |
| ·引物设计 | 第39页 |
| ·PCR扩增DPV US4截段基因 | 第39页 |
| ·DPV US4截段基因重组表达质粒pET-32a(+)/US4M的构建 | 第39页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第39-40页 |
| ·Western-blot检测截段重组蛋白抗原性 | 第40页 |
| ·截段重组蛋白作为抗原建立间接ELISA检测鸭瘟病毒抗体 | 第40-41页 |
| ·抗原最佳包被浓度及抗体最适稀释倍数的确定 | 第40页 |
| ·酶标抗体最佳工作浓度测定 | 第40页 |
| ·阴阳性临界值判定标准的确定 | 第40页 |
| ·特异性试验 | 第40页 |
| ·稳定试验 | 第40页 |
| ·敏感性试验 | 第40-41页 |
| 3. 结果 | 第41-48页 |
| ·DPV US4截段基因的的扩增、T-克隆与鉴定结果 | 第41页 |
| ·US4截段基因的PCR扩增结果 | 第41页 |
| ·US4截段基因T克隆鉴定结果 | 第41页 |
| ·DPV US4截段基因重组表达质粒pET-32a(+)/US4M的构建 | 第41-42页 |
| ·重组表达质粒pET32a(+)/US4M的构建与酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pET-32a(+)/US4M的诱导表达及表达形式分析 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pET32a(+)/US4M表达条件的优化 | 第43-45页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第43页 |
| ·诱导温度条件的优化 | 第43页 |
| ·诱导时间的优化 | 第43-45页 |
| ·重组表达蛋白的纯化 | 第45页 |
| ·截段重组蛋白抗原性 | 第45-46页 |
| ·截段重组蛋白作为抗原建立间接ELISA检测鸭瘟病毒抗体 | 第46-48页 |
| ·抗原最佳包被浓度和血清最适稀释倍数的确定 | 第46页 |
| ·酶标抗体最适浓度的确定 | 第46-47页 |
| ·阴阳性临界值判定标准的确定 | 第47页 |
| ·特异性试验 | 第47页 |
| ·稳定试验 | 第47-48页 |
| ·敏感性试验 | 第48页 |
| 4. 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 鸭瘟病毒US4基因产物在感染细胞中的定位及表达时相研究 | 第50-54页 |
| 1. 材料 | 第50页 |
| ·毒株和细胞 | 第50页 |
| ·主要试剂及配制方法 | 第50页 |
| ·主要仪器设备 | 第50页 |
| 2. 实验方法 | 第50-51页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV US4在感染细胞中的定位及表达时相 | 第50-51页 |
| ·间接免疫荧光方法的建立 | 第50页 |
| ·间接免疫荧光检测方法条件的优化 | 第50页 |
| ·结果判定标准 | 第50-51页 |
| ·DPV US4基因产物在感染细胞中的定位及表达时相研究 | 第51页 |
| ·DPV US4基因产物的表达是否依赖于病毒DNA合成的检测 | 第51页 |
| 3. 结果 | 第51页 |
| ·优化条件结果 | 第51页 |
| ·DPV US4基因产物的亚细胞定位及表达时相分析 | 第51页 |
| 4. 讨论 | 第51-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介以及攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第60页 |
