| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略符号 | 第8-9页 |
| 引言 | 第9-22页 |
| 一、 建立稳定表达GPCR 的细胞系 | 第22-32页 |
| 1 前言 | 第22-24页 |
| 2 实验材料 | 第24-25页 |
| ·实验试剂 | 第24-25页 |
| ·实验仪器 | 第25页 |
| 3 实验方法 | 第25-28页 |
| ·构建CXCR2 和CXCR3 质粒 | 第25页 |
| ·质粒转染和受体表达 | 第25-26页 |
| ·流式细胞计数(FACS)检测细胞表面受体表达 | 第26-27页 |
| ·免疫磁珠快速分选法(MACS)筛选表达受体的细胞 | 第27-28页 |
| ·数据处理 | 第28页 |
| 4 实验结果 | 第28-30页 |
| ·FACS 检测趋化因子受体在CHO 细胞表面的表达情况 | 第28页 |
| ·[355]GTPγS 结合实验检测趋化因子受体的功能 | 第28-30页 |
| 5 讨论 | 第30-32页 |
| 二、SPA-WGA 法[(35)~S]GTPγS 结合实验(SPA-WGA-based [(35)~S]GTPγs binding assay) | 第32-42页 |
| 1 前言 | 第32-33页 |
| 2 实验材料 | 第33-34页 |
| ·实验试剂 | 第33-34页 |
| ·实验仪器 | 第34页 |
| 3 实验方法 | 第34-35页 |
| ·细胞和细胞培养 | 第34页 |
| ·细胞膜的制备 | 第34页 |
| ·SPA-WGA 法[(35)~S]GTPγS 结合实验 | 第34页 |
| ·抽滤法[(35)~S]GTPγS 结合实验 | 第34-35页 |
| ·数据处理 | 第35页 |
| 4 实验结果 | 第35-41页 |
| ·SPA-WGA 微球用量的最小化 | 第35-36页 |
| ·CHO-CCR5 细胞膜用量的优化 | 第36-38页 |
| ·GDP 浓度的优化 | 第38页 |
| ·孵育时间的优化 | 第38-39页 |
| ·仪器测量时间范围的限定 | 第39-40页 |
| ·与抽滤法[(35)~S]GTPγS 结合实验比较 | 第40-41页 |
| 5 讨论 | 第41-42页 |
| 三、SPA-WGA 法受体配体结合实验(SPA-WGA-based ligand-receptor binding assay) | 第42-46页 |
| 1 前言 | 第42页 |
| 2 实验材料 | 第42页 |
| ·实验试剂 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| 3 实验方法 | 第42-43页 |
| ·细胞培养和受体表达 | 第42-43页 |
| ·细胞膜的制备 | 第43页 |
| ·数据处理 | 第43页 |
| 4 实验结果 | 第43-45页 |
| ·SPA-WGA 微球用量的最小化 | 第43-44页 |
| ·细胞膜用量的优化 | 第44-45页 |
| ·DPDPE 和Naloxone 与[3~H]DPN 竞争曲线 | 第45页 |
| 5 讨论 | 第45-46页 |
| 四.SPA-抗体-[35S]GTPγS 结合实验(Anti-G protein SPA -based [(35)~S]GTPγS binding assay) | 第46-53页 |
| 1 前言 | 第46-48页 |
| 2 实验材料 | 第48页 |
| ·实验试剂 | 第48页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| 3 实验方法 | 第48-49页 |
| ·细胞培养和受体表达 | 第48页 |
| ·细胞膜的制备 | 第48页 |
| ·SPA-抗体-[355]GTPγS 结合实验测量多巴胺受体D1 和D2 与G_s 或G_o 偶联激活情况 | 第48-49页 |
| ·实验数据处理 | 第49页 |
| 4 实验结果 | 第49-52页 |
| 5 讨论 | 第52-53页 |
| 全文总结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 专利 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
