| 图片目录 | 第1-12页 |
| 表格目录 | 第12-13页 |
| 中文摘要 | 第13-16页 |
| 英文摘要 | 第16-19页 |
| 第一部分 麻疯树β-1，3葡聚糖酶纯化、性质及抗菌活性研究 | 第19-61页 |
| 第一章 麻疯树β-1，3葡聚糖酶的提取纯化、性质及其分布特异性检测 | 第20-45页 |
| 摘要 | 第20页 |
| 引言 | 第20-22页 |
| 1 材料和方法 | 第22-29页 |
| 1．1 实验材料 | 第22页 |
| 1．1．1 材料 | 第22页 |
| 1．1．2 药品、试剂与器材 | 第22页 |
| 1．2 实验方法 | 第22-29页 |
| 1．2．1 麻疯树β-1，3葡聚糖酶的粗级分离 | 第22-23页 |
| 1．2．2 麻疯树β-1，3葡聚糖酶的纯化 | 第23页 |
| 1．2．3 酶活性检测 | 第23-24页 |
| 1．2．4 酶活性峰的纯度检测、亚基组成及分子量的确定 | 第24-26页 |
| 1．2．5 等电点(pl)的测定 | 第26页 |
| 1．2．6 荧光光谱 | 第26页 |
| 1．2．7 紫外光谱 | 第26页 |
| 1．2．8 氨基酸组成分析 | 第26页 |
| 1．2．9 酶学性质研究 | 第26-27页 |
| 1．2．10 抗体的制备 | 第27-28页 |
| 1．2．11 麻疯树β-1，3葡聚糖酶分布特异性检测 | 第28-29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-40页 |
| 2．1 麻疯树β-1，3葡聚糖酶的粗级分离 | 第29-31页 |
| 2．2 β-1，3葡聚糖酶活性峰的获得 | 第31-32页 |
| 2．3 β-1，3葡聚糖酶的纯度、亚基组成的鉴定及分子量测定 | 第32-33页 |
| 2．4 酶学性质的测定 | 第33-35页 |
| 2．5 等电点的测定 | 第35页 |
| 2．6 紫外光谱 | 第35-36页 |
| 2．7 荧光光谱 | 第36-37页 |
| 2．8 氨基酸组成 | 第37页 |
| 2．9 麻疯树β-1，3葡聚糖酶抗血清的检测 | 第37-39页 |
| 2．10 麻疯树β-1，3葡聚糖酶的分布特异性检测 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-41页 |
| 小结 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 第二章 麻疯树β-1，3葡聚糖酶的抗真菌活性及其它生物学活性的研究 | 第45-61页 |
| 摘要 | 第45页 |
| 引言 | 第45-47页 |
| 1 材料和方法 | 第47-49页 |
| 1．1 实验材料 | 第47页 |
| 1．1．1 真菌菌种 | 第47页 |
| 1．1．2 实验动物及血液 | 第47页 |
| 1．1．3 药品、试剂与器材 | 第47页 |
| 1．2 方法 | 第47-49页 |
| 1．2．1 植物病原真菌的生长同步化培养 | 第47-48页 |
| 1．2．2 麻疯树β-1，3葡聚糖酶对菌丝生长的抑制作用 | 第48页 |
| 1．2．3 葡聚糖酶对病原真菌孢子形成的影响 | 第48页 |
| 1．2．4 葡聚糖酶对病原真菌孢子萌发的影响 | 第48页 |
| 1．2．5 葡聚糖酶对病原真菌菌丝形态的影响 | 第48-49页 |
| 1．2．6 葡聚糖酶对病原真菌生长量的影响 | 第49页 |
| 1．2．7 菌丝细胞壁观察 | 第49页 |
| 1．2．8 凝血活性测定 | 第49页 |
| 1．2．9 小鼠急性毒理实验 | 第49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-57页 |
| 2．1 麻疯树β-1，3葡聚糖酶对菌丝生长的抑制作用 | 第49-51页 |
| 2．2 麻疯树β-1，3葡聚糖酶对病原真菌孢子形成的影响 | 第51页 |
| 2．3 麻疯树β-1，3葡聚糖酶对病原真菌孢子萌发的影响 | 第51-52页 |
| 2．4 麻疯树β-1，3葡聚糖酶对病原真菌菌丝形态的影响 | 第52-53页 |
| 2．5 麻疯树β-1，3葡聚糖酶对病原真菌菌丝生长量的影响 | 第53-54页 |
| 2．6 菌丝细胞壁观察 | 第54页 |
| 2．7 小鼠急性毒理实验 | 第54-56页 |
| 2．8 凝血实验 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-58页 |
| 小结 | 第58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 第二部分 麻疯树毒蛋白(curcin)的抗真菌活性及转基因烟草的研究 | 第61-93页 |
| 第三章 麻疯树毒蛋白(curcin)的抗真菌活性研究及其分布特异性检测 | 第62-74页 |
| 摘要 | 第62页 |
| 引言 | 第62-63页 |
| 1 材料与方法 | 第63-65页 |
| 1．1 实验材料 | 第63页 |
| 1．2 方法 | 第63-65页 |
| 1．2．1 curcin的分离与纯化 | 第63-64页 |
| 1．2．2 病原真菌菌丝生长的同步化培养 | 第64页 |
| 1．2．3 Curcin对病原真菌菌丝生长的抑制作用 | 第64页 |
| 1．2．4 Curcin对病原真菌孢子形成的影响 | 第64页 |
| 1．2．5 Curcin对病原真菌孢子萌发的影响 | 第64页 |
| 1．2．6 Curcin对病原真菌菌丝形态的影响 | 第64-65页 |
| 1．2．7 Curcin对病原真菌蛋白质合成的影响 | 第65页 |
| 1．2．8 Curcin特异性分布检测 | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-70页 |
| 2．1 纯化的curcin的获得 | 第65页 |
| 2．2 Curcin对病原真菌菌丝生长的抑制作用 | 第65-66页 |
| 2．3 Curcin对病原真菌孢子形成的影响 | 第66页 |
| 2．4 Curcin对病原真菌孢子萌发的影响 | 第66-67页 |
| 2．5 Curcin对病原真菌菌丝形态的影响 | 第67-68页 |
| 2．6 Curcin对病原真菌蛋白质合成的影响 | 第68-70页 |
| 2．7 Curcin的特异性分布检测 | 第70页 |
| 3 讨论 | 第70-71页 |
| 小结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-74页 |
| 第四章 麻疯树毒蛋白(curcin)基因转化烟草的研究 | 第74-93页 |
| 摘要 | 第74页 |
| 引言 | 第74-75页 |
| 1 材料和方法 | 第75-82页 |
| 1．1 实验材料 | 第75-77页 |
| 1．1．1 植物材料 | 第76页 |
| 1．1．2 菌种 | 第76页 |
| 1．1．3 载体 | 第76页 |
| 1．1．4 试剂(盒)和酶 | 第76-77页 |
| 1．1．5 培养基 | 第77页 |
| 1．2 实验方法 | 第77-82页 |
| 1．2．1 麻疯树基因组DNA的提取 | 第77-78页 |
| 1．2．2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第78页 |
| 1．2．3 农杆菌感受态细胞的制备 | 第78页 |
| 1．2．4 curcin ORF的扩增 | 第78-79页 |
| 1．2．5 表达载体构建 | 第79-80页 |
| 1．2．6 农杆菌对烟草叶片的感染 | 第80-81页 |
| 1．2．7 再生烟草苗的获得及形态观察 | 第81页 |
| 1．2．8 诱导生根 | 第81页 |
| 1．2．9 转基因植株检测 | 第81-82页 |
| 1．2．10 再生植株移栽 | 第82页 |
| 1．2．11 转基因烟草的抗病性测定 | 第82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-86页 |
| 2．1 curcin基因的扩增 | 第82-83页 |
| 2．2 表达载体的构建 | 第83-84页 |
| 2．3 Kan抗性植株的分化与形态观察 | 第84-85页 |
| 2．4 转基因植株的鉴定 | 第85-86页 |
| 2．5 转基因植株的移栽 | 第86页 |
| 2．6 转基因抗病性分析 | 第86页 |
| 3 讨论 | 第86-91页 |
| 小结 | 第91页 |
| 参考文献 | 第91-93页 |
| 第三部分 真菌等逆境诱导蛋白JFIP开放阅读框(ORF)的克隆与表达 | 第93-144页 |
| 第五章 真菌侵染及水分和温度胁迫下麻疯树诱导蛋白(JFIP)阅读框(ORF)的克隆及序列分析 | 第94-130页 |
| 摘要 | 第94页 |
| 引言 | 第94-96页 |
| 1 实验材料和方法 | 第96-101页 |
| 1．1 实验材料 | 第96-97页 |
| 1．1．1 植物材料、菌株及常用质粒载体 | 第96页 |
| 1．1．2 试剂盒、酶和药品 | 第96页 |
| 1．1．3 引物设计与组合 | 第96-97页 |
| 1．2 实验方法 | 第97-101页 |
| 1．2．1 聚乙二醇(PEG)-6000水分胁迫 | 第97-98页 |
| 1．2．2 温度胁迫处理 | 第98页 |
| 1．2．3 真菌侵染处理 | 第98页 |
| 1．2．4 根、茎、叶相对含水量(RWC)的测定 | 第98页 |
| 1．2．5 麻疯树幼叶DNA提取 | 第98页 |
| 1．2．6 麻疯树幼苗(根、茎、叶)总RNA提取 | 第98-99页 |
| 1．2．7 DNA或RNA浓度和纯度测定 | 第99页 |
| 1．2．8 一步法反转录聚合酶链式扩增 | 第99-100页 |
| 1．2．9 编码JFIP的ORF的基因组分离 | 第100页 |
| 1．2．10 PCR、RT-PCR扩增片段的回收、连接 | 第100页 |
| 1．2．11 PCR、RT-PCR扩增片段的转化和鉴定 | 第100-101页 |
| 1．2．12 蛋白质提取 | 第101页 |
| 1．2．13 SDS-PAGE与Western杂交分析 | 第101页 |
| 2 结果与分析 | 第101-121页 |
| 2．1 温度、水分胁迫下根、茎、叶RWC的变化 | 第101-103页 |
| 2．2 麻疯树根、茎、叶RNA和幼叶DNA的质量分析 | 第103页 |
| 2．3 JFIP前体蛋白ORF的cDNA分离 | 第103-104页 |
| 2．4 JFIP ORF的基因组分离与鉴定 | 第104-110页 |
| 2．5 JFIP ORF推测的氨基酸序列分析 | 第110-116页 |
| 2．6 JFIP的性质和结构预测 | 第116-120页 |
| 2．7 SDS-PAGE and Western检测 | 第120-121页 |
| 3 讨论 | 第121-125页 |
| 小结 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-130页 |
| 第六章 麻疯树中真菌等逆境胁迫诱导蛋白JFIP基因在大肠杆菌中的表达 | 第130-144页 |
| 摘要 | 第130页 |
| 引言 | 第130-131页 |
| 1 材料和方法 | 第131-136页 |
| 1．1 实验材料 | 第131-132页 |
| 1．1．1 材料、菌株及质粒载体 | 第131页 |
| 1．1．2 试剂、试剂盒、酶 | 第131-132页 |
| 1．1．3 引物 | 第132页 |
| 1．2 实验方法 | 第132-136页 |
| 1．2．1 JFIP基因片段制备 | 第132-133页 |
| 1．2．2 表达载体制备 | 第133页 |
| 1．2．3 大肠杆菌JM109及M15感受态细胞的制备 | 第133页 |
| 1．2．4 表达载体的连接、克隆及鉴定 | 第133-134页 |
| 1．2．5 表达产物菌落Western检测 | 第134-135页 |
| 1．2．6 JFIP的诱导表达与SDS-PAGE检测 | 第135页 |
| 1．2．7 表达产物的Western印迹分析 | 第135-136页 |
| 1．2．8 表达产物可溶性检测 | 第136页 |
| 1．2．9 表达产物的变性、复性与纯化 | 第136页 |
| 1．2．10 表达产物的抗真菌活性检测 | 第136页 |
| 2 结果与分析 | 第136-142页 |
| 2．1 表达载体的构建 | 第137页 |
| 2．2 重组质粒表达检测 | 第137-140页 |
| 2．3 麻疯树毒蛋白(JFIP)基因的表达产物的纯化 | 第140页 |
| 2．4 纯化蛋白的活性检测 | 第140-142页 |
| 3 讨论 | 第142页 |
| 小结 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-144页 |
| 第四部分 文献综述 | 第144-169页 |
| 第七章 植物抗真菌蛋白及其基因工程研究进展 | 第145-169页 |
| 1 植物抗真菌蛋白概述 | 第145-153页 |
| 1．1 抗真菌蛋白的分类与命名 | 第145-146页 |
| 1．2 各类抗真菌蛋白的分布与功能特点 | 第146-150页 |
| 1．2．1 病程相关蛋白 | 第146-148页 |
| 1．2．2 核糖体失活蛋白 | 第148-149页 |
| 1．2．3 植物防卫素 | 第149页 |
| 1．2．4 类亲环蛋白 | 第149页 |
| 1．2．5 脂类转运蛋白 | 第149页 |
| 1．2．6 其它抗真菌蛋白 | 第149-150页 |
| 1．3 抗真菌蛋白抗菌机理分析 | 第150-153页 |
| 1．3．1 真菌细胞壁结构分析 | 第150-151页 |
| 1．3．2 β-1，3葡聚糖酶抗菌机理分析 | 第151-152页 |
| 1．3．3 几丁质酶抗菌机理分析 | 第152页 |
| 1．3．4 核糖体失活蛋白抗真菌机理分析 | 第152-153页 |
| 2 植物抗真菌蛋白的基因工程研究进展 | 第153-160页 |
| 2．1 已应用于植物抗病基因工程的抗真菌蛋白基因 | 第153页 |
| 2．2 抗真菌蛋白基因的真核表达研究进展 | 第153-160页 |
| 2．2．1 β-1，3葡聚糖酶基因的真核表达 | 第153-155页 |
| 2．2．2 几丁质基因的真核表达 | 第155-156页 |
| 2．2．3 RIP基因的真核表达 | 第156-157页 |
| 2．2．4 防卫素基因及其它抗真菌蛋白基因的真核表达 | 第157页 |
| 2．2．5 抗真菌蛋白基因之间的协同表达 | 第157-160页 |
| 3 前景与讨论 | 第160-161页 |
| 参考文献 | 第161-169页 |
