| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 能源状况 | 第10-11页 |
| 2 纤维燃料乙醇 | 第11-12页 |
| 3 基因敲除技术概述 | 第12-16页 |
| ·基因敲除技术的概念 | 第13页 |
| ·基因敲除的原理和方法 | 第13-15页 |
| ·利用基因同源重组进行基因敲除 | 第13页 |
| ·条件性敲除 | 第13页 |
| ·利用随机插入突变进行基因敲除 | 第13页 |
| ·基因捕获法 | 第13-14页 |
| ·RNAi 引起的基因敲除 | 第14-15页 |
| ·RNAi 阻断基因表达的机理 | 第14页 |
| ·RNAi 基因敲除的优点及应用 | 第14-15页 |
| ·实现基因敲除的其他原理 | 第15页 |
| ·基因敲除技术的应用及前景 | 第15页 |
| ·改造生物、培育新的生物品种 | 第15页 |
| ·建立生物模型 | 第15页 |
| ·疾病的分子机理研究和疾病的基因治疗 | 第15页 |
| ·提供廉价的异种移植器官 | 第15页 |
| ·免疫学中的应用 | 第15页 |
| ·基因敲除技术的缺陷 | 第15-16页 |
| 4 嗜鞣管囊酵母P-01 的性能 | 第16页 |
| 5 本课题的目的意义 | 第16-17页 |
| 6 本课题研究的内容及技术路线 | 第17-19页 |
| 第二章 嗜鞣管囊酵母P-01 乙醇脱氢酶Ⅱ活性测定及其对乙醇发酵的影响 | 第19-23页 |
| 1 材料与方法 | 第19-20页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·供试菌株 | 第19页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-20页 |
| ·菌种活化 | 第19-20页 |
| ·发酵 | 第20页 |
| ·酶活性测定 | 第20页 |
| 2 结果与分析 | 第20-21页 |
| ·酶活分析 | 第20页 |
| ·酸度与pH 值分析 | 第20-21页 |
| 3 本章小结 | 第21-23页 |
| 第三章 嗜鞣管囊酵母P-01 乙醇脱氢酶Ⅱ基因克隆 | 第23-32页 |
| 1 材料与方法 | 第23-28页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·供试菌株 | 第23页 |
| ·PCR 引物 | 第23页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第23页 |
| ·培养基及缓冲溶液 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| ·数据库及软件 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-28页 |
| ·酵母基因组DNA 的提取 | 第24页 |
| ·RNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·同源性分析及设计引物 | 第25页 |
| ·PCR 反应 | 第25-28页 |
| ·PCR 产物检测、纯化、测序 | 第28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-31页 |
| ·嗜鞣管囊酵母P-01，南阳酒精酵母1308 基因组DNA | 第28页 |
| ·嗜鞣管囊酵母P-01RNA | 第28-29页 |
| ·乙醇脱氢酶Ⅱ基因克隆 | 第29页 |
| ·乙醇脱氢酶Ⅱ基因克隆测序结果分析 | 第29-30页 |
| ·3′Race 结果 | 第30页 |
| ·5′RACE 结果 | 第30页 |
| ·全长基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·同源性分析 | 第31页 |
| 3 本章小结 | 第31-32页 |
| 第四章 嗜鞣管囊酵母P-01 乙醇脱氢酶Ⅱ基因的敲除 | 第32-41页 |
| 1 材料与方法 | 第32-35页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·供试菌株及质粒 | 第32页 |
| ·PCR 引物（5′至3′） | 第32页 |
| ·方法 | 第32-35页 |
| ·嗜鞣管囊酵母P01 生长曲线的测定 | 第32页 |
| ·SFH-PCR（short flanking homology PCR） | 第32-33页 |
| ·抗性基因的克隆与回收 | 第32-33页 |
| ·醋酸锂转化 | 第33页 |
| ·嗜鞣管囊酵母P01 G418 最低耐受性试验 | 第33页 |
| ·重组子的PCR 验证试验 | 第33-34页 |
| ·重组子基因组DNA 的提取 | 第33页 |
| ·PCR 产物验证 | 第33-34页 |
| ·纯合体的验证 | 第34页 |
| ·纯糖发酵试验 | 第34页 |
| ·纤维糖化液发酵试验 | 第34-35页 |
| ·纤维质原料的预处理 | 第34页 |
| ·纤维质原料的酶解糖化 | 第34-35页 |
| ·总还原糖含量测定 | 第35页 |
| ·ND、MC 发酵玉米秸秆 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-40页 |
| ·嗜鞣管囊酵母P-01 生长曲线 | 第35页 |
| ·嗜鞣管囊酵母P-01 对G418 的最低耐受性 | 第35-36页 |
| ·重组子的验证实验 | 第36-38页 |
| ·重组子抗性筛选 | 第36-37页 |
| ·PCR 产物验证 | 第37页 |
| ·部分重组子的全糖发酵结果 | 第37-38页 |
| ·重组子ND、MC 的验证实验 | 第38-40页 |
| ·重组子ND、MC 的乙醇脱氢酶Ⅱ活性测定 | 第38页 |
| ·PCR 产物单酶切和测序验证 | 第38-39页 |
| ·重组子ND、MC 的遗传稳定性试验 | 第39-40页 |
| ·ND、MC 的发酵结果 | 第40页 |
| 3 本章小结 | 第40-41页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第41-43页 |
| 1 结论 | 第41页 |
| 2 讨论 | 第41-43页 |
| ·DNA 提取方法 | 第41-42页 |
| ·基因敲除的完整性 | 第42页 |
| ·重组子酒精产率提高的进一步验证 | 第42页 |
| ·全糖发酵重组子的基础性研究 | 第42页 |
| ·MC、ND 的进一步改造建议 | 第42页 |
| ·adh2 的后续研究 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| Abstract | 第46页 |
