| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| ·脂肪酶研究进展 | 第11-15页 |
| ·脂肪酶简介 | 第11页 |
| ·脂肪酶的分类 | 第11-12页 |
| ·脂肪酶的结构 | 第12页 |
| ·脂肪酶分子生物学研究 | 第12-13页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第13-15页 |
| ·低微生物的研究状况 | 第15-17页 |
| ·低温微生物简介 | 第15-16页 |
| ·低温微生物的生态分布及应用前景 | 第16-17页 |
| ·冷适应微生物的冷适应机制—合成低温催化活性的低温酶(Cold-adapted enzyme) | 第17页 |
| ·低微脂肪酶的研究状况 | 第17-21页 |
| ·低温脂肪酶简介 | 第17页 |
| ·低温脂肪酶的生理生化特征 | 第17-18页 |
| ·低温脂肪酶的结构特征 | 第18-19页 |
| ·低温脂肪酶的研究方法及热点 | 第19-20页 |
| ·低温脂肪酶的应用前景 | 第20-21页 |
| ·立题依据 | 第21-25页 |
| ·脂肪酶是重要的理论研究用酶 | 第21-22页 |
| ·脂肪酶是重要的工业用酶 | 第22-23页 |
| ·研究低温脂肪酶的意义 | 第23-25页 |
| 第二章 产低温脂肪酶细菌的分离、鉴定及部分酶学性质研究 | 第25-41页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·样品采集 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-32页 |
| ·产低温脂肪酶菌株的分离 | 第25-26页 |
| ·PF16的形态学观察 | 第26页 |
| ·酶的初步分离纯化 | 第26-27页 |
| ·对硝基苯酚(p-Nitrophenyl)微摩尔消光系数的测定 | 第27页 |
| ·酶活检测 | 第27页 |
| ·蛋白含量测定 | 第27-28页 |
| ·部分酶学性质研究 | 第28-29页 |
| ·菌落PCR扩增分离菌株的16S rRNA基因序列 | 第29-31页 |
| ·DNA序列测定 | 第31-32页 |
| ·系统发育分析 | 第32页 |
| ·结果 | 第32-39页 |
| ·产低温脂肪酶菌株的分离 | 第32页 |
| ·菌株的形态学观察 | 第32-33页 |
| ·对硝基苯酚(p-Nitrophenyl)微摩尔消光系数 | 第33页 |
| ·考马斯亮蓝标准曲线的绘制 | 第33-34页 |
| ·粗酶液酶活检测结果 | 第34-35页 |
| ·酶的热稳定性 | 第35-36页 |
| ·pH值稳定性 | 第36-37页 |
| ·分离菌株的16S rRNA序列及比对结果 | 第37-38页 |
| ·系统发育分析结果 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 Pseudomona sp.PF16基因文库的构建 | 第41-47页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·菌种与质粒 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·试剂及药品 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-45页 |
| ·克隆假单胞菌PF16菌株的低温脂肪酶基因的技术路线 | 第41-42页 |
| ·基因文库的构建 | 第42-45页 |
| ·筛选脂肪酶基因 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-46页 |
| ·PF16菌株基因文库的构建 | 第45-46页 |
| ·脂肪酶基因的筛选 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 Pseudomona sp.PF16脂肪酶基因的克隆 | 第47-58页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·菌种与质粒 | 第47页 |
| ·试剂及药品 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-54页 |
| ·序列比对及引物合成 | 第47-51页 |
| ·脂肪酶基因片段的扩增 | 第51-54页 |
| ·结果 | 第54-57页 |
| ·PCR扩增结果 | 第54-56页 |
| ·Pseudomonas sp.PF16的脂肪酶基因序列 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 第五章 低温脂肪酶Lip-PF16的异源表达 | 第58-74页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·细菌和质粒 | 第58页 |
| ·培养基 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-66页 |
| ·引物的合成 | 第59页 |
| ·引物稀释 | 第59页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第59页 |
| ·PCR产物的纯化即胶回收 | 第59-60页 |
| ·感受态细胞的制作 | 第60页 |
| ·表达载体的构建 | 第60-64页 |
| ·目的蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第64-65页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第65页 |
| ·脂肪酶的酶活检测 | 第65-66页 |
| ·结果 | 第66-73页 |
| ·Lip-PF16/pET21a表达载体构建路线 | 第66页 |
| ·PCR扩增低温脂肪酶基因 | 第66-67页 |
| ·菌落PCR鉴定Lip-PF16/pMD18-T/DH5a | 第67-68页 |
| ·重组质粒Lip-PF16/pMD18-T的酶切鉴定 | 第68-69页 |
| ·脂肪酶基因序列的测序确认 | 第69页 |
| ·菌落PCR鉴定Lip-PF16/pET21a/DH5a | 第69页 |
| ·重组质粒Lip-PF16/pET21a的酶切鉴定 | 第69-70页 |
| ·重组脂肪酶基因诱导表达后的SDS-PAGE检测 | 第70页 |
| ·酶活检测结果 | 第70-73页 |
| ·讨论 | 第73-74页 |
| 第六章 总结 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第81-82页 |
| 附录B 实验药品与设备 | 第82-87页 |
