摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-6页 |
符号缩写 | 第10-11页 |
第一章 绪论 | 第11-43页 |
1.1 体液分子诊断研究 | 第11-14页 |
1.1.1 体液分子诊断简介 | 第11页 |
1.1.2 血液分子诊断 | 第11-12页 |
1.1.3 尿液分子诊断 | 第12-13页 |
1.1.4 唾液分子诊断 | 第13-14页 |
1.2 细胞外囊泡 | 第14-25页 |
1.2.1 外泌体和微泡 | 第17-21页 |
1.2.2 外泌体和微泡的富集方法 | 第21-22页 |
1.2.3 细胞外囊泡的表征方法 | 第22-23页 |
1.2.4 体液细胞外囊泡的核酸研究 | 第23-24页 |
1.2.5 体液细胞外囊泡的蛋白组学研究 | 第24-25页 |
1.3 蛋白质组学的研究方法 | 第25-32页 |
1.3.1 基于双向凝胶的定量蛋白组学技术 | 第26-27页 |
1.3.2 基于质谱的定量蛋白组学技术 | 第27-32页 |
1.3.2.1 基质辅助激光解析(MALDI)和电喷雾(ESI)质谱分析技术 | 第27-28页 |
1.3.2.2 Label-free非标记质谱定量分析 | 第28-29页 |
1.3.2.3 iTRAQ质谱定量分析 | 第29-30页 |
1.3.2.4 MRM/PRM目标蛋白质绝对定量 | 第30-31页 |
1.3.2.5 DIA/SWATH质谱定量分析 | 第31-32页 |
1.4 肺癌及其分子诊断 | 第32-36页 |
1.4.1 肺癌简介 | 第32-33页 |
1.4.2 肺癌临床诊断的研究现状 | 第33-34页 |
1.4.3 肺癌标志物研究进展 | 第34-36页 |
1.5 本文的研究内容及策略 | 第36-38页 |
1.5.1 研究内容 | 第36-37页 |
1.5.2 研究策略 | 第37-38页 |
参考文献 | 第38-43页 |
第二章 建立唾液中细胞外囊泡的富集方法 | 第43-64页 |
2.1 前言 | 第43-44页 |
2.2 实验材料和方法 | 第44-49页 |
2.2.1 试剂和仪器 | 第44-45页 |
2.2.2 唾液的收集 | 第45页 |
2.2.3 唾液中高丰度蛋白去除方法的建立 | 第45-47页 |
2.2.3.1 淀粉亲和层析色谱和膜结合系统的建立(ACCF) | 第45-47页 |
2.2.3.2 淀粉亲和层析方法的评估 | 第47页 |
2.2.4 建立ACCF系统富集唾液微泡 | 第47-49页 |
2.2.4.1 唾液微泡的富集 | 第47页 |
2.2.4.2 唾液微泡蛋白的提取 | 第47-48页 |
2.2.4.3 SDS-PAGE微泡蛋白分离 | 第48页 |
2.2.4.4 唾液微泡的粒径分析 | 第48页 |
2.2.4.5 微泡蛋白的质谱鉴定 | 第48-49页 |
2.2.4.6 微泡蛋白的生物信息学分析 | 第49页 |
2.3 结果与讨论 | 第49-62页 |
2.3.1 高丰度蛋白去除方法的条件优化 | 第49-52页 |
2.3.2 新方法对唾液内微泡富集效率的评价 | 第52-56页 |
2.3.3 探讨唾液淀粉酶对唾液微泡提取效率影响的机制 | 第56-58页 |
2.3.4 肺癌病人唾液微泡蛋白组学分析 | 第58-62页 |
2.4 本章总结 | 第62页 |
参考文献 | 第62-64页 |
第三章 唾液内微泡和外泌体蛋白组的比较分析 | 第64-90页 |
3.1 前言 | 第64-65页 |
3.2 实验材料和方法 | 第65-70页 |
3.2.1 试剂和仪器 | 第65-66页 |
3.2.2 唾液的收集 | 第66页 |
3.2.3 唾液微泡和外泌体的提取 | 第66页 |
3.2.4 唾液微泡和外泌体蛋白的提取 | 第66-67页 |
3.2.5 唾液微泡和外泌体的表征 | 第67-68页 |
3.2.5.1 微泡和外泌体的电镜测试 | 第67-68页 |
3.2.5.2 微泡和外泌体的粒径测试 | 第68页 |
3.2.5.3 微泡和外泌体的标志性蛋白的免疫印迹检测 | 第68页 |
3.2.6 唾液微泡和外泌体蛋白的鉴定 | 第68-70页 |
3.2.6.1 微泡和外泌体蛋白的SDS-PAGE分离 | 第68页 |
3.2.6.2 微泡和外泌体蛋白的质谱鉴定 | 第68-69页 |
3.2.6.3 唾液内微泡和外泌体蛋白Label free分析及验证 | 第69-70页 |
3.3 结果与讨论 | 第70-86页 |
3.3.1 唾液微泡和外泌体的富集离心条件优化结果 | 第70-71页 |
3.3.2 唾液微泡和外泌体的表征结果 | 第71-76页 |
3.3.3 唾液微泡和外泌体的蛋白组比较结果 | 第76-78页 |
3.3.4 肺癌患者唾液胞外囊泡的蛋白组分析结果 | 第78-81页 |
3.3.5 Western blot验证 | 第81-86页 |
3.4 本章总结 | 第86-87页 |
参考文献 | 第87-90页 |
第四章 唾液和血液中外泌体蛋白组的比较分析 | 第90-110页 |
4.1 前言 | 第90-91页 |
4.2 实验部分 | 第91-95页 |
4.2.1 试剂和仪器 | 第91-92页 |
4.2.2 唾液的收集 | 第92页 |
4.2.3 血液的收集 | 第92页 |
4.2.4 血液和唾液样本的前处理 | 第92-93页 |
4.2.5 唾液和血液外泌体的提取 | 第93-94页 |
4.2.6 唾液和血液外泌体的表征 | 第94-95页 |
4.2.6.1 唾液和血液外泌体的电镜测试 | 第94页 |
4.2.6.2 唾液和血液外泌体的粒径测试 | 第94页 |
4.2.6.3 唾液和血液外泌体的标志性蛋白的免疫印迹检测 | 第94-95页 |
4.2.7 肺癌患者唾液和血液外泌体的蛋白组学分析 | 第95页 |
4.2.7.1 唾液和血液外泌体蛋白的SDS-PAGE分离 | 第95页 |
4.2.7.2 唾液和血液外泌体蛋白的质谱鉴定 | 第95页 |
4.3 结果与讨论 | 第95-107页 |
4.3.1 唾液外泌体和血液外泌体的富集 | 第95-98页 |
4.3.2 唾液外泌体和血液外泌体的表征结果 | 第98-100页 |
4.3.3 唾液外泌体和血液外泌体蛋白组学的比较结果 | 第100-103页 |
4.3.4 肺癌外泌体蛋白组学分析 | 第103-107页 |
4.4 本章总结 | 第107-108页 |
参考文献 | 第108-110页 |
第五章 唾液中细胞外囊泡蛋白的基因注释分析 | 第110-118页 |
5.1 前言 | 第110-111页 |
5.2 唾液内细胞外囊泡的比较蛋白组学分析 | 第111-114页 |
5.2.1 唾液内微泡蛋白组学分析 | 第112-113页 |
5.2.2 唾液内外泌体蛋白组学分析 | 第113-114页 |
5.3 正常组和癌症组唾液细胞外囊泡蛋白成分对比结果 | 第114-116页 |
5.4 本章总结 | 第116页 |
参考文献 | 第116-118页 |
第六章 总结与展望 | 第118-120页 |
附录 | 第120-150页 |
致谢 | 第150-151页 |
攻读博士学位期间已发表或录用的论文 | 第151-153页 |