| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-50页 |
| 1.1 葡萄白粉病与灰霉病 | 第16页 |
| 1.2 植物免疫系统介绍 | 第16-17页 |
| 1.3 WRKY转录因子研究进展 | 第17-21页 |
| 1.3.1 WRKY转录因子概述 | 第17-18页 |
| 1.3.2 WRKY转录因子在植物中的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.3 WRKY转录因子在葡萄中的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3.4 WRKY转录因子在植物免疫反应中的调控网络 | 第20-21页 |
| 1.4 CRISPR基因组编辑技术 | 第21-48页 |
| 1.4.1 CRISPR基因组编辑技术的发展 | 第21-22页 |
| 1.4.2 CRISPR基因组编辑系统的介绍 | 第22-29页 |
| 1.4.3 CRISPR基因组编辑系统在果树上的研究进展 | 第29-30页 |
| 1.4.4 果树遗传转化方法介绍 | 第30-34页 |
| 1.4.5 CRISPR基因组编辑系统在果树上的潜在应用 | 第34-45页 |
| 1.4.6 CRISPR编辑效率的影响因素 | 第45-48页 |
| 1.4.7 CRISPR基因组编辑技术在果树上应用的局限性 | 第48页 |
| 1.5 目的和意义 | 第48-50页 |
| 第二章 葡萄VqWRKY52 基因的克隆与异源表达分析 | 第50-76页 |
| 2.1 材料 | 第50页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第50页 |
| 2.1.2 病原菌 | 第50页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第50页 |
| 2.2 方法 | 第50-56页 |
| 2.2.1 植物材料培养条件与病原菌的保存扩繁 | 第50-51页 |
| 2.2.2 葡萄叶片激素处理 | 第51页 |
| 2.2.3 实时定量PCR分析 | 第51-52页 |
| 2.2.4 载体构建 | 第52-53页 |
| 2.2.5 拟南芥遗传转化 | 第53-54页 |
| 2.2.6 GUS分析 | 第54-55页 |
| 2.2.7 病原菌接种 | 第55页 |
| 2.2.8 ROS分析和细胞死亡检测 | 第55-56页 |
| 2.2.9 统计分析 | 第56页 |
| 2.3 结果与分析 | 第56-72页 |
| 2.3.1 葡萄VqWRKY52 基因的克隆与序列分析 | 第56-57页 |
| 2.3.2 葡萄VqWRKY52 启动子的克隆与顺式作用元件分析 | 第57-59页 |
| 2.3.3 葡萄VqWRKY52受SA处理诱导表达 | 第59-60页 |
| 2.3.4 葡萄VqWRKY52 不同发育时期表达模式分析 | 第60页 |
| 2.3.5 葡萄VqWRKY52 拟南芥转基因植株的获得 | 第60页 |
| 2.3.6 在拟南芥中过表达VqWRKY52 增强了对白粉菌的抗性 | 第60-65页 |
| 2.3.7 接种白粉菌后防御相关基因的表达 | 第65页 |
| 2.3.8 在拟南芥pad4 中过表达VqWRKY52 分析对白粉菌的抗性 | 第65-67页 |
| 2.3.9 在拟南芥中过量表达VqWRKY52 增强了对PstDC3000 的抗性 | 第67-69页 |
| 2.3.10 接种PstDC3000 后防御相关基因的表达分析 | 第69-71页 |
| 2.3.11 在拟南芥中过量表达VqWRKY52 降低了对灰霉菌的抗性 | 第71-72页 |
| 2.3.12 灰霉菌接种后防御相关基因的相对表达水平 | 第72页 |
| 2.4 讨论 | 第72-75页 |
| 2.5 小结 | 第75-76页 |
| 第三章 葡萄WRKY52 基因的过表达与功能缺失株系的获得 | 第76-102页 |
| 3.1 材料 | 第76-77页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第76页 |
| 3.1.2 病原菌 | 第76页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第76-77页 |
| 3.2 方法 | 第77-83页 |
| 3.2.1 植物材料培养条件与病原菌的保存扩繁 | 第77页 |
| 3.2.2 葡萄转基因材料的准备 | 第77页 |
| 3.2.3 过表达载体构建 | 第77-78页 |
| 3.2.4 CRISPR/Cas9基因组编辑载体的构建 | 第78-79页 |
| 3.2.5 无核白葡萄的遗传转化 | 第79-81页 |
| 3.2.6 半定量和实时定量PCR分析 | 第81页 |
| 3.2.7 CRISPR/Cas9 介导的基因组编辑株系的鉴定 | 第81页 |
| 3.2.8 脱靶情况分析 | 第81-82页 |
| 3.2.9 病原菌接种 | 第82页 |
| 3.2.10 过表达株系的鉴定 | 第82页 |
| 3.2.11 转基因株系的炼苗 | 第82-83页 |
| 3.2.12 统计分析 | 第83页 |
| 3.3 结果与分析 | 第83-99页 |
| 3.3.1 靶点选择和载体构建 | 第83-85页 |
| 3.3.2 CRISPR/Cas9 载体的葡萄转化和转基因突变体系的鉴定 | 第85-89页 |
| 3.3.3 鉴定CRISPR/Cas9 诱导的VvWRKY52 的突变 | 第89-91页 |
| 3.3.4 鉴定转基因突变株系中的突变类型 | 第91-92页 |
| 3.3.5 脱靶分析 | 第92-93页 |
| 3.3.6 在无核白中敲除VvWRKY52 增强对灰霉病的抗性 | 第93-95页 |
| 3.3.7 过表达载体的构建与葡萄遗传转化 | 第95-97页 |
| 3.3.8 过表达转基因株系的鉴定和表型观察 | 第97页 |
| 3.3.9 过表达转基因株系和功能缺失株系的炼苗 | 第97-99页 |
| 3.4 讨论 | 第99-100页 |
| 3.5 小结 | 第100-102页 |
| 第四章 葡萄WRKY52 调控白粉病抗性的功能鉴定与机理分析 | 第102-126页 |
| 4.1 材料 | 第102页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第102页 |
| 4.1.2 病原菌 | 第102页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第102页 |
| 4.2 方法 | 第102-104页 |
| 4.2.1 白粉菌的处理 | 第102页 |
| 4.2.2 细胞死亡及活性氧的观察 | 第102-103页 |
| 4.2.3 半定量分析转基因株系抗病相关基因表达 | 第103页 |
| 4.2.4 转录组分析 | 第103-104页 |
| 4.3 结果与分析 | 第104-121页 |
| 4.3.1 葡萄WRKY52 过表达,功能缺失及野生型接种白粉菌表型观察 | 第104-105页 |
| 4.3.2 细胞死亡及活性氧的染色观察 | 第105-106页 |
| 4.3.3 半定量分析抗病相关基因的表达 | 第106-107页 |
| 4.3.4 转录组差异基因统计 | 第107页 |
| 4.3.5 转录组差异基因COG功能注释 | 第107-111页 |
| 4.3.6 转录组差异基因KEGG功能注释 | 第111页 |
| 4.3.7 转录组差异基因集合中转录因子统计与差异基因motif分析 | 第111-116页 |
| 4.3.8 加权基因共表达网络分析 | 第116-121页 |
| 4.4 讨论 | 第121-125页 |
| 4.5 小结 | 第125-126页 |
| 第五章 结论与创新点 | 第126-127页 |
| 5.1 结论 | 第126页 |
| 5.2 创新点 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-150页 |
| 缩略词 | 第150-151页 |
| 致谢 | 第151-152页 |
| 个人简介 | 第152-153页 |
