| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略语及符号 | 第12-13页 |
| 绪论 | 第13-14页 |
| 第一章 犬流感的流行及检测方法研究进展 | 第14-30页 |
| 1 犬流感的分布与流行 | 第14-18页 |
| 1.1 H3N8亚型犬流感 | 第14-15页 |
| 1.2 HSN1亚型犬流感 | 第15-16页 |
| 1.3 H3N2亚型犬流感 | 第16页 |
| 1.4 HSN2亚型犬流感 | 第16-17页 |
| 1.5 H1N1亚型犬流感 | 第17页 |
| 1.6 其他亚型犬流感 | 第17-18页 |
| 2 流感病毒的分子结构与理化特性 | 第18-19页 |
| 2.1 流感病毒的形态结构 | 第18页 |
| 2.2 流感病毒的理化特性 | 第18-19页 |
| 3 流感病毒的生物学特性 | 第19-21页 |
| 3.1 增殖特性 | 第19-21页 |
| 3.1.1 病毒的吸附 | 第19页 |
| 3.1.2 病毒的侵入 | 第19-20页 |
| 3.1.3 病毒RNA的合成 | 第20页 |
| 3.1.4 病毒蛋白的合成和RNA的包装 | 第20页 |
| 3.1.5 病毒的出芽和释放 | 第20-21页 |
| 3.2 血凝特性 | 第21页 |
| 4 流感病毒的分子特性 | 第21-24页 |
| 4.1 聚合酶蛋白 | 第22页 |
| 4.2 HA蛋白 | 第22页 |
| 4.3 NP蛋白 | 第22-23页 |
| 4.4 NA蛋白 | 第23页 |
| 4.5 M蛋白 | 第23页 |
| 4.6 NS1和NS2蛋白 | 第23-24页 |
| 5 犬流感病毒的检测方法 | 第24-27页 |
| 5.1 流感病毒的分离及鉴定 | 第24页 |
| 5.2 血清学检测方法 | 第24-26页 |
| 5.2.1 血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验 | 第24-25页 |
| 5.2.2 琼脂扩散试验(AGID) | 第25页 |
| 5.2.3 免疫荧光试验(IFA) | 第25页 |
| 5.2.4 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第25页 |
| 5.2.5 免疫层析胶体金技术(GICA) | 第25-26页 |
| 5.3 分子生物学检测方法 | 第26-27页 |
| 5.3.1 RT-PCR | 第26页 |
| 5.3.2 实时荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 5.3.3 环介导等温扩增法(LAMP) | 第27页 |
| 6 CIV的危害及公共卫生学意义 | 第27-28页 |
| 7 研究目的与意义 | 第28-30页 |
| 第二章 H3N2亚型犬流感病毒核蛋白的原核及真核表达 | 第30-50页 |
| 1 材料与方法 | 第31-39页 |
| 1.1 材料 | 第31页 |
| 1.1.1 病毒、质粒及宿主菌 | 第31页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 1.2 方法 | 第31-39页 |
| 1.2.1 原核表达 | 第31-36页 |
| 1.2.2 真核表达 | 第36-39页 |
| 2 结果 | 第39-46页 |
| 2.1 原核表达 | 第39-43页 |
| 2.1.1 NP基因的PGR扩增 | 第39页 |
| 2.1.2 NP基因T克隆的鉴定 | 第39-40页 |
| 2.1.3 两种表达质粒NP-pGEX-4T-1及NP-pET28a的鉴定 | 第40-41页 |
| 2.1.4 重组NP蛋白的诱导表达及最佳表达质粒与宿主菌组合的选择 | 第41页 |
| 2.1.5 表达条件的优化 | 第41-43页 |
| 2.1.6 最佳洗脱咪唑浓度的确定 | 第43页 |
| 2.1.7 重组蛋白的Western blot鉴定 | 第43页 |
| 2.2 真核表达 | 第43-46页 |
| 2.2.1 重组杆状病毒转移载体的鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.2 重组穿梭质粒的鉴定 | 第44页 |
| 2.2.3 重组杆状病毒的鉴定 | 第44-45页 |
| 2.2.4 重组蛋白的表达与检测 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-50页 |
| 第三章 重组NP蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立 | 第50-62页 |
| 1 材料与方法 | 第50-54页 |
| 1.1 材料 | 第50-51页 |
| 1.2 方法 | 第51-54页 |
| 1.2.1 间接ELISA检测方法的具体步骤 | 第51页 |
| 1.2.2 最佳抗原的选择其最佳包被浓度及血清稀释度的确定(方阵法) | 第51页 |
| 1.2.3 最佳抗原包被条件的选择 | 第51-52页 |
| 1.2.4 封闭剂与最佳作用时间的选择 | 第52页 |
| 1.2.5 最佳一抗稀释倍数与作用时间的确定 | 第52页 |
| 1.2.6 最佳二抗稀释倍数与作用时间的确定 | 第52页 |
| 1.2.7 最佳底物显色时间的确定 | 第52页 |
| 1.2.8 临界值的确定 | 第52-53页 |
| 1.2.9 灵敏性试验 | 第53页 |
| 1.2.10 特异性试验 | 第53页 |
| 1.2.11 重复性试验 | 第53页 |
| 1.2.12 临床血清的检测 | 第53-54页 |
| 2 结果 | 第54-60页 |
| 2.1 最佳抗原及其包被浓度及血清稀释度的选择 | 第54-55页 |
| 2.2 最佳抗原包被条件的确定 | 第55页 |
| 2.3 最佳封闭剂的选择 | 第55-56页 |
| 2.4 最佳封闭时间的选择 | 第56页 |
| 2.5 最佳血清作用时间的确定 | 第56-57页 |
| 2.6 最佳二抗稀释倍数的确定 | 第57页 |
| 2.7 最佳二抗作用时间的确定 | 第57-58页 |
| 2.8 最佳显色时间的确定 | 第58页 |
| 2.9 临界值的确定 | 第58-59页 |
| 2.10 间接ELISA方法的灵敏性 | 第59页 |
| 2.11 间接ELISA方法的特异性 | 第59页 |
| 2.12 间接ELISA方法的重复性试验 | 第59页 |
| 2.13 间接ELISA检测方法与HI方法的比较 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 全文总结 | 第62-64页 |
| 本文创新点 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 附录: 常用试剂的配制 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第80页 |
