| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 上篇 文献综述 | 第13-34页 |
| 第一章 致病疫霉效应分子的生物学功能 | 第14-34页 |
| 1 马铃薯晚疫病的简介及防治措施 | 第14-17页 |
| 1.1 马铃薯晚疫病的起源,发生及危害 | 第14-15页 |
| 1.2 马铃薯晚疫病的症状 | 第15-16页 |
| 1.3 马铃薯晚疫病的生活史 | 第16页 |
| 1.4 马铃薯晚疫病的防治措施 | 第16-17页 |
| 2 马铃薯晚疫病效应分子蛋白的种类及其研究进展 | 第17-22页 |
| 2.1 质外体效应蛋白(Apoplastic Effectors) | 第19-20页 |
| 2.2 细胞质效应蛋白(Cytoplasmic effectors) | 第20-22页 |
| 3 马铃薯晚疫病效应分子诱导的防御反应 | 第22-24页 |
| 3.1 PAMPs触发的植物免疫反应(PAMPs- triggered immunity,PTI) | 第22-23页 |
| 3.2 无毒效应分子触发的植物免疫反应(Effector- triggered immunity,ETI) | 第23-24页 |
| 4 Nudix蛋白家族 | 第24-27页 |
| 4.1 Nudix蛋白家族的生物学功能 | 第24-25页 |
| 4.2 植物Nudix蛋白参与调控植物免疫反应 | 第25-26页 |
| 4.3 植物病原菌的Nudix 蛋白参与调控植物免疫反应 | 第26-27页 |
| 5 总结与展望 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-34页 |
| 下篇 研究内容 | 第34-79页 |
| 第一章 致病疫霉Nudix效应分子的克隆及序列分析 | 第35-51页 |
| 1 材料与方法 | 第37-42页 |
| 1.1 试剂及培养基 | 第37页 |
| 1.1.1 配制LB液体培养基及固体培养基 | 第37页 |
| 1.1.2 配制黑麦-V8(RSA-V8)致病疫霉产孢培养基 | 第37页 |
| 1.2 供试材料的准备 | 第37-38页 |
| 1.3 致病疫霉游动孢子的诱导及接种番茄 | 第38页 |
| 1.4 RNA提取 | 第38页 |
| 1.5 RNA逆转录 | 第38-39页 |
| 1.6 侵染阶段番茄cDNA库的构建 | 第39-40页 |
| 1.7 Real Time PCR | 第40页 |
| 1.8 Inoue法制备大肠杆菌超级感受态 | 第40-41页 |
| 1.9 致病疫霉游动孢子侵染烟草 | 第41页 |
| 1.10 烟草中目的基因表达蛋白检测 | 第41-42页 |
| 1.10.1 农杆菌介导的瞬时表达体系 | 第41页 |
| 1.10.2 提取目的基因蛋白 | 第41页 |
| 1.10.3 Western blot | 第41-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-47页 |
| 2.1 致病疫霉Nudix 效应子家族的生物信息学分析 | 第42-44页 |
| 2.2 三个致病疫霉Nudix 效应分子的克隆和序列分析 | 第44-45页 |
| 2.3 致病疫霉三个Nudix 效应分子在致病疫霉侵染阶段转录表达模式 | 第45-46页 |
| 2.4 植物中异源表达致病疫霉Nudix效应分子增强植物感病性 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 第二章 致病疫霉Nudix效应分子生化活性的初步研究 | 第51-65页 |
| 1 材料与方法 | 第52-56页 |
| 1.1 试剂及培养基 | 第52页 |
| 1.2 制备感受态细胞 | 第52-53页 |
| 1.3 原核表达蛋白 | 第53-55页 |
| 1.3.1 试剂准备: | 第53-54页 |
| 1.3.2 操作步骤: | 第54-55页 |
| 1.3.3 注意事项: | 第55页 |
| 1.4 原核表达蛋白的富集和纯化 | 第55-56页 |
| 1.5 UPLC液相条件以及MS/MS质谱条件 | 第56页 |
| 1.6 UPLC-MS/MS样品准备 | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-61页 |
| 2.1 致病疫霉Nudix效应分子的酶活作用底物预测 | 第56-57页 |
| 2.2 致病疫霉Nudix 效应分子的重要作用位点分析 | 第57-58页 |
| 2.3 致病疫霉Nudix 效应分子酶活测定 | 第58-61页 |
| 2.3.1 LC-MS/MS质谱条件的确定 | 第58-59页 |
| 2.3.2 致病疫霉Nudix 效应分子的Nudix水解酶活性测定 | 第59-61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| 第三章 致病疫霉Nudix效应分子参与致病疫霉致病性 | 第65-79页 |
| 1 材料与方法 | 第67-69页 |
| 1.1 试剂及培养基 | 第67页 |
| 1.2 载体的构建 | 第67-68页 |
| 1.2.1 Golden Gate技术构建载体及原核表达载体的构建 | 第67-68页 |
| 1.2.2 Nudix 突变体载体构建 | 第68页 |
| 1.3 Nudix 效应分子抑制疫霉菌激发子诱导的细胞死亡测试 | 第68页 |
| 1.4 烟草中瞬时表达目的基因的亚细胞定位观察 | 第68-69页 |
| 1.5 烟草中目的基因表达蛋白检测 | 第69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-74页 |
| 2.1 Nudix效应分子的亚细胞定位 | 第69-70页 |
| 2.2 Nudix效应分子抑制多种疫霉菌激发子诱导的细胞死亡 | 第70-71页 |
| 2.3 Nudix效应分子NUD3.2抑制多种疫霉菌激发子诱导的细胞死亡依赖于Nudix水解酶活性 | 第71-73页 |
| 2.4 Nudix效应分子抑制多种疫霉菌激发子诱导的细胞死亡依赖于细胞质定位 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-79页 |
| 附录 | 第79-81页 |
| 全文总结及创新点 | 第81-83页 |
| 攻读硕士期间发表的研究论文 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
