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A型流感病毒蛋白NEP与宿主蛋白GPS2互作的研究

摘要第6-8页
Abstract第8-9页
缩略语第10-12页
1 文献综述第12-26页
    1.1 流感病毒第12-16页
        1.1.1 流感病毒基因组结构及其编码产物第13-14页
        1.1.2 流感病毒的生物学特性第14-16页
    1.2 流感病毒NEP蛋白第16-23页
        1.2.1 NEP的蛋白结构第16-18页
        1.2.2 NEP介导vRNP的核输出第18-21页
        1.2.3 NEP调控流感病毒的转录与复制第21-23页
    1.3 宿主蛋白GPS2第23-26页
        1.3.1 GPS2的概述第23-24页
        1.3.2 GPS2与多种蛋白发生相互作用行使转录调控作用第24-26页
2 研究目的与意义第26-27页
3 材料与方法第27-38页
    3.1 材料第27-29页
        3.1.1 病毒、细胞和菌株第27页
        3.1.2 本研究中用到的质粒第27页
        3.1.3 酶及主要试剂第27-28页
        3.1.4 抗体第28页
        3.1.5 主要实验仪器第28-29页
        3.1.6 引物第29页
    3.2 方法第29-38页
        3.2.1 PCR反应第29-30页
        3.2.2 PCR产物回收及纯化第30页
        3.2.3 连接反应第30页
        3.2.4 质粒转化大肠杆菌细胞第30-31页
        3.2.5 质粒提取第31页
        3.2.6 重组子的鉴定第31页
        3.2.7 定点突变第31-32页
        3.2.8 转染第32-33页
        3.2.9 重组蛋白的浓度测定第33页
        3.2.10 Western Blot第33页
        3.2.11 原核表达第33-34页
        3.2.12 GST-pull down第34页
        3.2.13 免疫共沉淀第34-35页
        3.2.14 间接免疫荧光第35页
        3.2.15 哺乳动物双杂交第35-36页
        3.2.16 RNA的提取、反转录以及定量PCR第36-37页
        3.2.17 统计分析第37-38页
4 结果与分析第38-58页
    4.1 NEP与GPS2相互作用的确定第38-44页
        4.1.1 哺乳动物双杂交技术初步确定NEP与GPS2发生相互作用第38-39页
        4.1.2 免疫共沉淀技术验证NEP与GPS2之间的相互作用第39-41页
        4.1.3 GSTpull-down体外验证NEP与GPS2之间的相互作用第41-42页
        4.1.4 NEP与GPS2的亚细胞定位第42-44页
    4.2 NEP与GPS2互作保守性的研究第44-45页
    4.3 NEP上蛋白互作结构域的确定第45-48页
        4.3.1 哺乳动物双杂交筛选NEP上的互作结构域第45-46页
        4.3.2 GST pull-down确定NEP上与GPS2的互作结构域第46-48页
    4.4 NEP上与GPS2互作的结构域为新的核输出信号第48-52页
        4.4.1 新的核输出信号的发现第48-49页
        4.4.2 NES2能与GPS2一起转运至细胞质中第49-52页
    4.5 NEP通过与GPS2互作减缓对病毒聚合酶活力的激活第52-53页
        4.5.1 GPS2正调控病毒聚合酶活力第52-53页
        4.5.2 NEP减缓GPS2对聚合酶活力的正调控第53页
    4.6 GPS2抑制流感病毒感染激活的AP-1依赖基因的表达第53-58页
5 讨论第58-62页
    5.1 相互作用的验证第58-59页
    5.2 NEP与GPS2互作保守性的研究第59页
    5.3 NEP上相互作用的结构域第59-60页
    5.4 相互作用生物学效应的挖掘第60-62页
6 小结第62-63页
参考文献第63-74页
致谢第74-75页
个人简介第75页

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