| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-26页 |
| 1.1 流感病毒 | 第12-16页 |
| 1.1.1 流感病毒基因组结构及其编码产物 | 第13-14页 |
| 1.1.2 流感病毒的生物学特性 | 第14-16页 |
| 1.2 流感病毒NEP蛋白 | 第16-23页 |
| 1.2.1 NEP的蛋白结构 | 第16-18页 |
| 1.2.2 NEP介导vRNP的核输出 | 第18-21页 |
| 1.2.3 NEP调控流感病毒的转录与复制 | 第21-23页 |
| 1.3 宿主蛋白GPS2 | 第23-26页 |
| 1.3.1 GPS2的概述 | 第23-24页 |
| 1.3.2 GPS2与多种蛋白发生相互作用行使转录调控作用 | 第24-26页 |
| 2 研究目的与意义 | 第26-27页 |
| 3 材料与方法 | 第27-38页 |
| 3.1 材料 | 第27-29页 |
| 3.1.1 病毒、细胞和菌株 | 第27页 |
| 3.1.2 本研究中用到的质粒 | 第27页 |
| 3.1.3 酶及主要试剂 | 第27-28页 |
| 3.1.4 抗体 | 第28页 |
| 3.1.5 主要实验仪器 | 第28-29页 |
| 3.1.6 引物 | 第29页 |
| 3.2 方法 | 第29-38页 |
| 3.2.1 PCR反应 | 第29-30页 |
| 3.2.2 PCR产物回收及纯化 | 第30页 |
| 3.2.3 连接反应 | 第30页 |
| 3.2.4 质粒转化大肠杆菌细胞 | 第30-31页 |
| 3.2.5 质粒提取 | 第31页 |
| 3.2.6 重组子的鉴定 | 第31页 |
| 3.2.7 定点突变 | 第31-32页 |
| 3.2.8 转染 | 第32-33页 |
| 3.2.9 重组蛋白的浓度测定 | 第33页 |
| 3.2.10 Western Blot | 第33页 |
| 3.2.11 原核表达 | 第33-34页 |
| 3.2.12 GST-pull down | 第34页 |
| 3.2.13 免疫共沉淀 | 第34-35页 |
| 3.2.14 间接免疫荧光 | 第35页 |
| 3.2.15 哺乳动物双杂交 | 第35-36页 |
| 3.2.16 RNA的提取、反转录以及定量PCR | 第36-37页 |
| 3.2.17 统计分析 | 第37-38页 |
| 4 结果与分析 | 第38-58页 |
| 4.1 NEP与GPS2相互作用的确定 | 第38-44页 |
| 4.1.1 哺乳动物双杂交技术初步确定NEP与GPS2发生相互作用 | 第38-39页 |
| 4.1.2 免疫共沉淀技术验证NEP与GPS2之间的相互作用 | 第39-41页 |
| 4.1.3 GSTpull-down体外验证NEP与GPS2之间的相互作用 | 第41-42页 |
| 4.1.4 NEP与GPS2的亚细胞定位 | 第42-44页 |
| 4.2 NEP与GPS2互作保守性的研究 | 第44-45页 |
| 4.3 NEP上蛋白互作结构域的确定 | 第45-48页 |
| 4.3.1 哺乳动物双杂交筛选NEP上的互作结构域 | 第45-46页 |
| 4.3.2 GST pull-down确定NEP上与GPS2的互作结构域 | 第46-48页 |
| 4.4 NEP上与GPS2互作的结构域为新的核输出信号 | 第48-52页 |
| 4.4.1 新的核输出信号的发现 | 第48-49页 |
| 4.4.2 NES2能与GPS2一起转运至细胞质中 | 第49-52页 |
| 4.5 NEP通过与GPS2互作减缓对病毒聚合酶活力的激活 | 第52-53页 |
| 4.5.1 GPS2正调控病毒聚合酶活力 | 第52-53页 |
| 4.5.2 NEP减缓GPS2对聚合酶活力的正调控 | 第53页 |
| 4.6 GPS2抑制流感病毒感染激活的AP-1依赖基因的表达 | 第53-58页 |
| 5 讨论 | 第58-62页 |
| 5.1 相互作用的验证 | 第58-59页 |
| 5.2 NEP与GPS2互作保守性的研究 | 第59页 |
| 5.3 NEP上相互作用的结构域 | 第59-60页 |
| 5.4 相互作用生物学效应的挖掘 | 第60-62页 |
| 6 小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 个人简介 | 第75页 |
