| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-35页 |
| 1.1 引言 | 第11-13页 |
| 1.2 腈水合酶 | 第13-17页 |
| 1.2.1 腈水合酶的结构和特性 | 第13-14页 |
| 1.2.2 腈水合酶的生物调节 | 第14页 |
| 1.2.3 腈水合酶的水解机理 | 第14-15页 |
| 1.2.4 腈水合酶的应用 | 第15-17页 |
| 1.3 腈水合酶底物特异性 | 第17-21页 |
| 1.3.1 化学选择性 | 第18-19页 |
| 1.3.2 区域选择性 | 第19页 |
| 1.3.3 立体选择性 | 第19-21页 |
| 1.4 酶催化底物腈水解的主要影响因素 | 第21-23页 |
| 1.4.1 底物及产物抑制作用影响 | 第21页 |
| 1.4.2 反应介质影响 | 第21-22页 |
| 1.4.3 其他因素影响 | 第22-23页 |
| 1.5 腈水合酶的分离纯化及酶学特性的研究现状 | 第23-25页 |
| 1.6 腈水合酶的两相水合工艺研究 | 第25-26页 |
| 1.6.1 两相体系的优势 | 第25页 |
| 1.6.2 有机溶剂的选择 | 第25页 |
| 1.6.3 腈水合酶两相水合体系的构建及工艺优化 | 第25-26页 |
| 1.7 本课题研究的目的、意义和研究内容 | 第26-28页 |
| 1.7.1 研究目的与意义 | 第26-27页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-35页 |
| 第二章 腈水合酶的分离纯化研究 | 第35-55页 |
| 2.1 前言 | 第35页 |
| 2.2 材料与方法 | 第35-44页 |
| 2.2.1 主要实验仪器 | 第35-36页 |
| 2.2.2 主要实验试剂 | 第36页 |
| 2.2.3 菌种及培养方法 | 第36-37页 |
| 2.2.4 蛋白质浓度测定 | 第37-38页 |
| 2.2.5 腈水合酶粗酶液条件优化 | 第38页 |
| 2.2.6 强碱性阴离子交换层析 | 第38-40页 |
| 2.2.7 疏水相互作用层析 | 第40-41页 |
| 2.2.8 阴离子交换层析 | 第41页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE电泳 | 第41-44页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第44-53页 |
| 2.3.1 蛋白质标准曲线 | 第44页 |
| 2.3.2 R.boritolerans FW815细胞破碎 | 第44-47页 |
| 2.3.3 强碱性阴离子交换层析过程的优化 | 第47-50页 |
| 2.3.4 疏水相互作用层析 | 第50页 |
| 2.3.5 阴离子交换层析 | 第50-51页 |
| 2.3.6 分离纯化检测结果及分析 | 第51页 |
| 2.3.7 SDS凝胶电泳和相对分子质量的测定 | 第51-53页 |
| 2.4 本章小节 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-55页 |
| 第三章 腈水合酶的酶学特性研究 | 第55-69页 |
| 3.1 前言 | 第55-56页 |
| 3.2 材料和方法 | 第56-59页 |
| 3.2.1 主要实验仪器和实验试剂 | 第56页 |
| 3.2.2 菌种培养方法和酶活分析方法 | 第56页 |
| 3.2.3 蛋白质浓度测定 | 第56页 |
| 3.2.4 腈水合酶的酶学特性考察 | 第56-58页 |
| 3.2.5 底物浓度对腈水合酶酶促反应的影响 | 第58页 |
| 3.2.6 产物浓度对腈水合酶酶促反应的影响 | 第58-59页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第59-67页 |
| 3.3.1 pH对酶促反应的影响 | 第59页 |
| 3.3.2 腈水合酶pH稳定性考察 | 第59-60页 |
| 3.3.3 温度对酶促反应的影响 | 第60页 |
| 3.3.4 酶的热稳定性 | 第60-62页 |
| 3.3.5 金属离子对酶促反应的影响 | 第62-63页 |
| 3.3.6 腈水合酶催化不同腈水合反应的本征催化的动力学参数 | 第63-65页 |
| 3.3.7 R.boritoleran FW815腈水合酶纯酶催化2,2-二甲基环丙甲腈生物水合反应分析 | 第65页 |
| 3.3.8 2,2-二甲基环丙甲腈浓度对腈水合酶酶促反应的影响 | 第65-66页 |
| 3.3.9 2,2-二甲基环丙甲酰胺浓度对腈水合酶酶促反应的影响 | 第66-67页 |
| 3.4 本章小节 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-69页 |
| 第四章 R.boritolerans FW815静息细胞催化制备2-氧代-1-吡咯烷基丁酰胺工艺研究 | 第69-81页 |
| 4.1 前言 | 第69页 |
| 4.2 材料和方法 | 第69-71页 |
| 4.2.1 主要实验仪器和实验试剂 | 第69-70页 |
| 4.2.2 菌种培养方法 | 第70页 |
| 4.2.3 微生物转化反应及酶活测定方法 | 第70页 |
| 4.2.4 转化pH值对酶活的影响 | 第70页 |
| 4.2.5 转化反应体系对酶活的影响 | 第70页 |
| 4.2.6 转化温度对酶活的影响 | 第70-71页 |
| 4.2.7 腈水合酶的热稳定性考察 | 第71页 |
| 4.2.8 金属离子对酶活的影响 | 第71页 |
| 4.2.9 添加菌体量对腈水合酶酶活的影响 | 第71页 |
| 4.2.10 一次性添加底物对腈水合酶酶活的影响 | 第71页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第71-80页 |
| 4.3.1 2-氧代-1-吡咯烷基丁酰胺的标准曲线 | 第71-72页 |
| 4.3.2 转化体系pH对酶活力的影响 | 第72-73页 |
| 4.3.3 反应体系对酶活力的影响 | 第73-74页 |
| 4.3.4 反应温度对酶活力的影响 | 第74-75页 |
| 4.3.5 温度对酶热稳定性的影响 | 第75-77页 |
| 4.3.6 金属离子对酶活力的影响 | 第77页 |
| 4.3.7 添加菌体量对酶活和比酶活的影响 | 第77-78页 |
| 4.3.8 底物浓度对2-氧代-1-吡啶烷基丁腈转化效率的影响 | 第78页 |
| 4.3.9 腈水合酶酶促反应动力学参数 | 第78-80页 |
| 4.4 本章小结 | 第80页 |
| 参考文献 | 第80-81页 |
| 第五章 水有机两相体系中2,2-二甲基环丙甲腈生物水合工艺研究 | 第81-93页 |
| 5.1 前言 | 第81页 |
| 5.2 材料和方法 | 第81-85页 |
| 5.2.1 主要实验仪器和实验试剂 | 第81-82页 |
| 5.2.2 菌种培养方法 | 第82页 |
| 5.2.3 酶活的测定 | 第82页 |
| 5.2.4 两相水合工艺有机溶剂的选择 | 第82-83页 |
| 5.2.5 底物浓度对两相水合反应的影响 | 第83页 |
| 5.2.6 菌体用量对两相水合反应的影响 | 第83-84页 |
| 5.2.7 有机溶剂相比对水-有机溶剂两相体系中2,2-二甲基环丙甲腈水合反应的影响 | 第84页 |
| 5.2.8 温度对水-有机溶剂两相体系中2,2-二甲基环丙甲腈水合反应的影响 | 第84页 |
| 5.2.9 pH值对水-有机溶剂两相体系中2,2-二甲基环丙甲腈水合反应的影响 | 第84-85页 |
| 5.2.10 离子强度对水-有机溶剂两相体系中2,2-二甲基环丙甲腈水合反应的影响 | 第85页 |
| 5.2.11 水-有机溶剂两相体系中2,2-二甲基环丙甲腈水合反应动力学 | 第85页 |
| 5.2.12 分析方法 | 第85页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第85-91页 |
| 5.3.1 水-有机溶剂两相体系构建中有机溶剂的选择 | 第85-87页 |
| 5.3.2 底物浓度对两相水合反应的影响 | 第87页 |
| 5.3.3 菌体用量对两相水合反应的影响 | 第87-88页 |
| 5.3.4 溶剂相比、温度、pH值、离子强度对两相水合反应的影响 | 第88-90页 |
| 5.3.5 两相水合反应的反应进程 | 第90-91页 |
| 5.4 本章小结 | 第91页 |
| 参考文献 | 第91-93页 |
| 第六章 结论与展望 | 第93-97页 |
| 6.1 结论 | 第93-95页 |
| 6.1.1 腈水合酶的分离纯化 | 第93-94页 |
| 6.1.2 腈水合酶酶学特性的研究 | 第94-95页 |
| 6.1.3 R.boritolerans FW815静息细胞催化转化2-氧代-1-吡咯烷基乙酰胺工艺条件优化 | 第95页 |
| 6.1.4 R.boritolerans FW815静息细胞催化2,2-二甲基环丙甲腈两相工艺研究 | 第95页 |
| 6.2 展望 | 第95-97页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
