| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 文章综述 | 第15-24页 |
| 1.“下丘脑-垂体-卵巢轴”研究 | 第15-18页 |
| 1.1“下丘脑-垂体-卵巢轴”组成与功能 | 第15-16页 |
| 1.2“下丘脑-垂体-卵巢轴”负反馈调控机制研究 | 第16-17页 |
| 1.3 动物发情周期过程“下丘脑-垂体-性腺轴”研究 | 第17-18页 |
| 2 TGF-β 家族在卵泡发育中的研究进展 | 第18-19页 |
| 2.1 TGF-β 家族简介 | 第18页 |
| 2.2 TGF-β 家族与卵泡发育 | 第18-19页 |
| 3“下丘脑-垂体-卵巢轴”中与繁殖相关miRNAs研究 | 第19-24页 |
| 3.1 miRNAs的起源与作用机制研究 | 第19-20页 |
| 3.2 miRNA与下丘脑-垂体研究 | 第20-21页 |
| 3.3 miRNA与动物卵巢的研究 | 第21-24页 |
| 引言 | 第24-25页 |
| 1 材料与方法 | 第25-38页 |
| 1.1 试验材料 | 第25-26页 |
| 1.1.1 试验动物及材料 | 第25页 |
| 1.1.2 主要仪器设备 | 第25页 |
| 1.1.3 主要试剂药品 | 第25-26页 |
| 1.2 试验方法与流程 | 第26-38页 |
| 1.2.1 卵泡期黄体期HPO差异表达miRNA分析 | 第26-29页 |
| 1.2.1.1 样本采集 | 第26页 |
| 1.2.1.2 总RNA提取 | 第26页 |
| 1.2.1.3 总RNA质量分析 | 第26页 |
| 1.2.1.4 测序文库的构建和测序分析 | 第26页 |
| 1.2.1.5 原始数据的过滤 | 第26页 |
| 1.2.1.6 Small RNA文库的分类注释 | 第26-27页 |
| 1.2.1.7 未知miRNA的预测 | 第27页 |
| 1.2.1.8 已知miRNA与未知miRNA的差异分析 | 第27页 |
| 1.2.1.9 表达模式聚类分析及其靶基因的预测 | 第27页 |
| 1.2.1.10 GO富集分析和KEGG通路分析miRNA的靶基因 | 第27-28页 |
| 1.2.1.11 定量验证高通量测序结果 | 第28-29页 |
| 1.2.2 山羊卵巢颗粒细胞的分离与鉴定 | 第29页 |
| 1.2.2.1 安淮山羊卵巢颗粒细胞分离 | 第29页 |
| 1.2.2.2 安淮山羊颗粒细胞的鉴定 | 第29页 |
| 1.2.3 验证chi-miR-144-3p靶向作用Follistian的试验 | 第29-31页 |
| 1.2.3.1 载体的构建 | 第29-31页 |
| 1.2.4 Follistian过表达与干扰载体的构建 | 第31-35页 |
| 1.2.4.1 载体构建FST基因CDS的扩增 | 第31-32页 |
| 1.2.4.2 PCR产物纯化 | 第32页 |
| 1.2.4.3 平末端克隆 | 第32页 |
| 1.2.4.5 p Topo-Blunt Simple载体与p LVX-IRES-Neo的双酶切 | 第32-33页 |
| 1.2.4.6 重组载体的构建 | 第33-34页 |
| 1.2.4.7 sh RNA2片段的设计与引物合成 | 第34页 |
| 1.2.4.8 引物退火 | 第34-35页 |
| 1.2.4.9 酶连及重组载体转化 | 第35页 |
| 1.2.5 慢病毒的包装以及感染卵巢颗粒细胞效果的验证 | 第35-38页 |
| 1.2.5.1 HEK-293T细胞的培养、转染以及病毒浓缩 | 第35-36页 |
| 1.2.5.2 病毒感染原代卵巢颗粒细胞效果的观察 | 第36-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-54页 |
| 2.1 电泳检测总RNA质量 | 第38页 |
| 2.2 文库RNA的质量分析 | 第38页 |
| 2.3 小RNA文库片段长短分布 | 第38-39页 |
| 2.4 公共及特有序列 | 第39-40页 |
| 2.5 sRNA比对山羊基因组 | 第40页 |
| 2.6 sRNA的分类注释 | 第40-41页 |
| 2.7 已知miRNA比对和新miRNA预测 | 第41-42页 |
| 2.8 已知miRNA和新miRNA的差异分析 | 第42-45页 |
| 2.9 已知miRNAs的表达模式的聚类分析 | 第45-46页 |
| 2.10 差异表达miRNA靶基因的GO分析 | 第46-48页 |
| 2.11 差异表达miRNA靶基因的KEGG分析 | 第48页 |
| 2.12 定量验证测序结果的趋势 | 第48-49页 |
| 2.13 山羊卵巢颗粒细胞的分离验证 | 第49-50页 |
| 2.14 验证卵巢卵泡期黄体期差异表达chi-miR1443p与FST靶向作用 | 第50-51页 |
| 2.15 过表达载体的构建 | 第51页 |
| 2.16 shRNA载体的构建 | 第51-52页 |
| 2.17 感染原代卵巢颗粒细胞效果鉴定 | 第52-53页 |
| 2.18 定量验证过表达与干扰效率 | 第53-54页 |
| 3. 讨论 | 第54-57页 |
| 3.1 山羊繁殖性状相关的miRNA挖掘 | 第54页 |
| 3.2 高通测序数据生物信息学分析 | 第54-55页 |
| 3.3 山羊卵巢颗粒细胞分离与鉴定 | 第55页 |
| 3.4 山羊目标miRNAs靶基因的验证 | 第55-56页 |
| 3.5 FST表达与干扰病毒载体构建与慢病毒的包装 | 第56-57页 |
| 4. 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
