| 摘要 | 第5-8页 |
| abstract | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第18-29页 |
| 1.1 乙型肝炎 | 第18页 |
| 1.2 乙肝疫苗 | 第18页 |
| 1.3 T细胞来源exosomes在免疫调节中的作用 | 第18-22页 |
| 1.3.1 Exosomes的形成 | 第19-20页 |
| 1.3.2 Exosomes的生物学特性 | 第20-21页 |
| 1.3.3 T细胞来源exosomes的免疫调节作用 | 第21-22页 |
| 1.3.3.1 T细胞来源exosomes的免疫抑制作用 | 第21-22页 |
| 1.2.3.2 T细胞来源exosomes的免疫增强作用 | 第22页 |
| 1.4 CD40/CD40L | 第22-25页 |
| 1.4.1 CD40/CD40L概述 | 第22-23页 |
| 1.4.2 CD40/CD40L的功能 | 第23-24页 |
| 1.4.3 CD40/CD40L的信号转导 | 第24-25页 |
| 1.5 本研究的目的、方法、实验设计以及意义 | 第25-29页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第25页 |
| 1.5.2 研究方法 | 第25-26页 |
| 1.5.3 实验设计 | 第26-27页 |
| 1.5.4 研究意义 | 第27-29页 |
| 第二章 CD4~+T细胞exosomes的提取与制备 | 第29-42页 |
| 2.1 实验仪器和材料 | 第29-32页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第29页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.3 实验试剂和材料 | 第30-31页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-36页 |
| 2.2.1 小鼠乙肝疫苗接种 | 第32页 |
| 2.2.2 CD4~+T细胞的磁珠分选、纯度鉴定以及活化状态检测 | 第32-33页 |
| 2.2.3 CD4~+T细胞exosomes提取及蛋白浓度测定 | 第33-34页 |
| 2.2.4 透射电镜观察CD4~+T细胞exosomes形态 | 第34页 |
| 2.2.5 CD4~+T细胞exosomes粒径分析 | 第34页 |
| 2.2.6 流式细胞仪检测CD4~+T细胞exosomes表面分子 | 第34页 |
| 2.2.7 Westernblot检测CD4~+T细胞exosomes相关蛋白的表达 | 第34-36页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-40页 |
| 2.3.1 小鼠CD4~+T细胞磁珠分选纯度 | 第36页 |
| 2.3.2 小鼠CD4~+T细胞体外活化后高表达CD40L和ICOS | 第36-37页 |
| 2.3.3 电镜下CD4~+T细胞exosomes的形态 | 第37页 |
| 2.3.4 CD4~+T细胞exosomes粒径分布 | 第37-38页 |
| 2.3.5 CD4~+T细胞exosomes表面分子的表达 | 第38-39页 |
| 2.3.6 CD4~+T细胞exosomes相关蛋白的表达 | 第39页 |
| 2.3.7 HBsAg疫苗接种小鼠来源的CD4~+T细胞能够分泌更多的exosomes | 第39-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 CD4~+T细胞exosomes对HBsAg疫苗接种小鼠体内HBsAb产生的影响 | 第42-52页 |
| 3.1 实验仪器和材料 | 第43-44页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第43页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第43页 |
| 3.1.3 实验试剂和材料 | 第43-44页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 3.2.1 CD4~+T细胞exosomes处理HBsAg疫苗接种小鼠 | 第44页 |
| 3.2.2 ELISA检测小鼠外周血血清中HBsAb及其亚型的含量 | 第44-45页 |
| 3.2.3 流式细胞仪检测小鼠脾脏中淋巴细胞比例的变化 | 第45页 |
| 3.2.3.1 脾脏B细胞和浆细胞的检测 | 第45页 |
| 3.2.3.2 脾脏Th1和Th2细胞的检测 | 第45页 |
| 3.2.4 流式细胞仪检测小鼠骨髓中浆细胞比例的变化 | 第45-46页 |
| 3.2.5 统计学分析 | 第46页 |
| 3.3 实验结果 | 第46-50页 |
| 3.3.1 CD4~+T细胞exosomes促进HBsAg疫苗接种小鼠血清中HBsAb的产生 | 第46-48页 |
| 3.3.2 CD4~+T细胞exosomes对HBsAg疫苗接种小鼠脾脏淋巴细胞比例的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.3 CD4~+T细胞exosomes促进HBsAg疫苗接种小鼠骨髓中浆细胞比例的升高 | 第49-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 CD4~+T细胞exosomes体外对B细胞功能的影响 | 第52-63页 |
| 4.1 实验仪器和材料 | 第52-53页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第52页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第52-53页 |
| 4.1.3 实验试剂和材料 | 第53页 |
| 4.1.4 主要溶液配制 | 第53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-56页 |
| 4.2.1 OVA免疫小鼠 | 第53页 |
| 4.2.2 CD4~+T细胞的磁珠分选及纯度鉴定 | 第53-54页 |
| 4.2.3 CD4~+T细胞exosomes提取及蛋白浓度测定 | 第54页 |
| 4.2.4 CD19+B细胞的磁珠分选及纯度鉴定 | 第54页 |
| 4.2.5 CD4~+T细胞exosomes内化实验 | 第54-55页 |
| 4.2.6 流式细胞仪检测CD4~+T细胞exosomes对B细胞表面分子表达的影响 | 第55页 |
| 4.2.6.1 活化与未活化CD4~+T细胞来源exosomes对B细胞表面分子表达的影响 | 第55页 |
| 4.2.6.2 不同剂量CD4~+T细胞exosomes对B细胞表面分子表达的影响 | 第55页 |
| 4.2.7 CD4~+T细胞exosomes对B细胞增殖的影响 | 第55-56页 |
| 4.2.8 CD4~+T细胞exosomes对B细胞产生抗体的影响 | 第56页 |
| 4.2.8.1 共培养体系上清中总IgG的检测 | 第56页 |
| 4.2.8.2 共培养体系上清中OVA特异性抗体的检测 | 第56页 |
| 4.3 实验结果 | 第56-61页 |
| 4.3.1 CD4~+T细胞exosomes能够被B细胞结合并内化 | 第56-57页 |
| 4.3.2 活化CD4~+T细胞来源的exosomes体外促进B细胞表面分子CD86和MHCⅡ的表达 | 第57-58页 |
| 4.3.3 CD4~+T细胞exosomes体外剂量依赖性促进B细胞表面分子CD86和MHCⅡ的表达 | 第58-59页 |
| 4.3.4 CD4~+T细胞exosomes体外促进B细胞的增殖 | 第59-60页 |
| 4.3.5 CD4~+T细胞exosomes体外促进B细胞产生抗体 | 第60-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-63页 |
| 第五章 CD40L在CD4~+T细胞exosomes介导的B细胞反应中的作用 | 第63-79页 |
| 5.1 实验仪器和材料 | 第63-65页 |
| 5.1.1 实验动物与细胞 | 第63页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第63-64页 |
| 5.1.3 实验试剂和材料 | 第64-65页 |
| 5.1.4 主要溶液配制 | 第65页 |
| 5.2 实验方法 | 第65-68页 |
| 5.2.1 OVA免疫小鼠 | 第65页 |
| 5.2.2 CD4~+T细胞的磁珠分选及纯度鉴定 | 第65页 |
| 5.2.3 CD4~+T细胞exosomes提取及蛋白浓度测定 | 第65页 |
| 5.2.4 流式细胞仪检测CD40L分子在活化和未活化CD4~+T细胞表面的表达 | 第65-66页 |
| 5.2.5 Westernblot检测CD40L分子在活化和未活化CD4~+T细胞及其来源exosomes中的表达 | 第66页 |
| 5.2.6 EL-4细胞培养 | 第66页 |
| 5.2.7 流式细胞仪检测EL-4细胞表型 | 第66-67页 |
| 5.2.8 EL-4细胞来源exosomes的提取 | 第67页 |
| 5.2.9 EL-4细胞来源exosomes蛋白浓度测定 | 第67页 |
| 5.2.10 EL-4细胞来源exosomes粒径分析 | 第67页 |
| 5.2.11 流式细胞仪检测EL-4细胞来源exosomes表面分子 | 第67页 |
| 5.2.12 Westernblot检测EL-4细胞来源exosomes相关蛋白的表达 | 第67页 |
| 5.2.13 CD40L敲减EL-4细胞株的建立 | 第67页 |
| 5.2.14 EL-4细胞来源exosomes对B细胞表面分子表达的影响 | 第67页 |
| 5.2.15 EL-4细胞来源exosomes对B细胞增殖的影响 | 第67-68页 |
| 5.2.16 EL-4细胞来源exosomes对B细胞产生IgG的影响 | 第68页 |
| 5.3 实验结果 | 第68-77页 |
| 5.3.1 活化CD4~+T细胞及其来源exosomes高表达CD40L分子 | 第68-69页 |
| 5.3.2 EL-4细胞表型 | 第69页 |
| 5.3.3 EL-4exosomes的粒径分布 | 第69-70页 |
| 5.3.4 EL-4exosomes表面分子的表达 | 第70页 |
| 5.3.5 EL-4exosomes相关蛋白的表达 | 第70-71页 |
| 5.3.6 EL-4exosomes对B细胞功能的影响 | 第71-72页 |
| 5.3.6.1 EL-4exosomes体外促进B细胞表面分子CD86和MHCⅡ的表达 | 第71页 |
| 5.3.6.2 EL-4exosomes体外促进B细胞的增殖 | 第71-72页 |
| 5.3.6.3 EL-4exosomes体外促进B细胞产生IgG | 第72页 |
| 5.3.7 构建CD40L敲减EL-4细胞株 | 第72-74页 |
| 5.3.7.1 CD40L敲减效率鉴定 | 第72-73页 |
| 5.3.7.2 CD40L敲减EL-4细胞株CD40L的表达 | 第73-74页 |
| 5.3.8 CD40L敲减EL-4细胞来源exosomesCD40L的表达 | 第74-75页 |
| 5.3.9 CD40L敲减EL-4细胞来源exosomes对B细胞功能的影响 | 第75-77页 |
| 5.3.9.1 CD40L敲减EL-4细胞来源exosomes对B细胞表面分子CD86和MHCⅡ表达的影响 | 第75页 |
| 5.3.9.2 CD40L敲减EL-4细胞来源exosomes对B细胞增殖的影响 | 第75-76页 |
| 5.3.9.3 CD40L敲减EL-4细胞来源exosomes对B细胞体外产生IgG的影响 | 第76-77页 |
| 5.4 讨论 | 第77-79页 |
| 第六章 主要结论及展望 | 第79-80页 |
| 6.1 主要结论 | 第79页 |
| 6.2 展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 攻读硕士学位期间获奖及发表的文章 | 第94页 |
