| 摘要 | 第5-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第14-21页 |
| 1.1 mTOR | 第14-17页 |
| 1.1.1 miRNA | 第15-16页 |
| 1.1.2 mTOR对miRNA的调控作用 | 第16页 |
| 1.1.3 mTOR对mRNA的调控作用 | 第16-17页 |
| 1.2 RNA干扰 | 第17-19页 |
| 1.2.1 Ago在RNA干扰中的作用 | 第18-19页 |
| 1.2.2 Argonaute磷酸化促进microRNA介导的沉默 | 第19页 |
| 1.3 Akt | 第19-21页 |
| 第二章 研究目的、方法、内容和研究意义 | 第21-23页 |
| 2.1 研究目的 | 第21页 |
| 2.2 研究方法 | 第21页 |
| 2.3 研究内容 | 第21-22页 |
| 2.3.1 mTORC1和Ago2是否存在物理性结合 | 第21页 |
| 2.3.2 mTORC1是与Ago2的哪一个结构域结合 | 第21-22页 |
| 2.3.3 验证phospho-Ago2(ser387)抗体特异性 | 第22页 |
| 2.3.4 mTORC1与Akt不同活性对Ago2387丝氨酸位点磷酸化的影响 | 第22页 |
| 2.3.5 mTORC1磷酸化Ago2387丝氨酸位点对Ago2的功能的影响 | 第22页 |
| 2.4 研究意义 | 第22-23页 |
| 第三章 mTORC1磷酸化Ago2387丝氨酸位点对miRNA静默效应的影响 | 第23-53页 |
| 3.1 实验仪器和耗材 | 第23-31页 |
| 3.1.1 主要的实验仪器 | 第23页 |
| 3.1.2 材料 | 第23-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-41页 |
| 3.2.1 质粒的制备 | 第31-32页 |
| 3.2.2 HA-Ago2质粒387位点丝氨酸突变为丙氨酸和谷氨酸质粒的构建 | 第32-33页 |
| 3.2.3 HA-Ago2质粒结构域质粒的构建 | 第33-34页 |
| 3.2.4 细胞培养 | 第34-35页 |
| 3.2.5 细胞传代 | 第35页 |
| 3.2.6 质粒转染HEK-293T细胞 | 第35页 |
| 3.2.7 免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP) | 第35-36页 |
| 3.2.8 Westernblot检测mTORCI和Ago2是否有物理性结合 | 第36-38页 |
| 3.2.9 RIP技术(RNABindingProteinImmunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀) | 第38-39页 |
| 3.2.10 GST融合蛋白Pull-Down实验 | 第39-41页 |
| 3.2.11 用Lambda蛋白磷酸酶(LambdaPP)处理IP样本,验证Ago2(Ser-387)抗体的特异性 | 第41页 |
| 3.3 实验结果 | 第41-51页 |
| 3.3.1 Co-IP实验证明了mTORC1与Ago2存在物理结合 | 第41-44页 |
| 3.3.2 mTORC1是与Ago2的哪一个结构域结合 | 第44-45页 |
| 3.3.3 mTORC1磷酸化Ago2387丝氨酸位点 | 第45-49页 |
| 3.3.4 在mTORC1不同活性状态下,用RIP技术检测了与Ago2结合的RNA的浓度 | 第49-50页 |
| 3.3.5 387 丝氨酸位点磷酸化对Ago2结合RNA能力的影响 | 第50-51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 结论及展望 | 第53-54页 |
| 4.1 主要结论 | 第53页 |
| 4.2 展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 综述：Ago2蛋白对miRNA静默效应的影响 | 第58-65页 |
| 1.Ago2蛋白 | 第58-59页 |
| 2.miRNA | 第59页 |
| 3.作用机制 | 第59-62页 |
| 3.1 参与miRNA装配过程 | 第59-60页 |
| 3.2 翻译抑制 | 第60-61页 |
| 3.3 GW蛋白 | 第61页 |
| 3.4 Ago2蛋白翻译后修饰 | 第61-62页 |
| 4.Ago2介导的基因静默与肿瘤的关系 | 第62页 |
| 5.展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及参加的会议 | 第66页 |
