金龟子绿僵菌诱导花生根建立共生的研究
| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-21页 |
| 1.1 绿僵菌防治害虫及内共生研究 | 第14-15页 |
| 1.1.1 花生田间绿僵菌应用现状 | 第14页 |
| 1.1.2 绿僵菌与植物内共生研究 | 第14-15页 |
| 1.2 有益微生物与植物互作研究 | 第15-17页 |
| 1.2.1 有益微生物共生研究概况 | 第15页 |
| 1.2.2 菌-植物共生分子机理研究 | 第15-17页 |
| 1.3 病原微生物与植物互作的致病/抗病机理研究 | 第17-19页 |
| 1.3.1 微生物侵染植物过程的共通性与差异性 | 第17页 |
| 1.3.2 植物对病原微生物的免疫作用 | 第17-19页 |
| 1.4 本研究的内容和目的 | 第19-20页 |
| 1.5 本研究的技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 绿僵菌和镰刀菌处理花生根转录组测序与分析 | 第21-38页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-25页 |
| 2.1.1 供试真菌和植物 | 第21页 |
| 2.1.2 孢子粉获得 | 第21页 |
| 2.1.3 花生根接菌处理 | 第21-22页 |
| 2.1.4 花生根总RNA提取 | 第22页 |
| 2.1.5 RNA文库的构建和测序 | 第22-23页 |
| 2.1.6 生物信息学分析流程 | 第23-24页 |
| 2.1.7 差异基因的分析 | 第24页 |
| 2.1.8 基因转录水平表达检测 | 第24页 |
| 2.1.9 水杨酸和茉莉酸检测 | 第24页 |
| 2.1.10 数据处理 | 第24-25页 |
| 2.2 结果与分析 | 第25-35页 |
| 2.2.1 花生根总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 测序原始数据质量情况 | 第26-27页 |
| 2.2.3 非冗余unigenes功能注释 | 第27页 |
| 2.2.4 非冗余unigenes功能分类 | 第27-28页 |
| 2.2.5 差异基因的表达分析 | 第28-29页 |
| 2.2.6 植物-真菌互作基因 | 第29-30页 |
| 2.2.7 差异基因功能分析 | 第30-32页 |
| 2.2.8 RT-qPCR验证差异表达基因 | 第32-35页 |
| 2.2.9 防御激素SA和JA的测定 | 第35页 |
| 2.3 讨论 | 第35-38页 |
| 第三章 绿僵菌与花生根共生的关键基因和途径分析 | 第38-50页 |
| 3.1 材料与方法 | 第38-41页 |
| 3.1.1 供试样品 | 第38页 |
| 3.1.2 花生根总RNA提取 | 第38页 |
| 3.1.3 花生根总蛋白提取 | 第38页 |
| 3.1.4 蛋白质还原烷基化和酶解 | 第38-39页 |
| 3.1.5 RT-qPCR检测 | 第39页 |
| 3.1.6 PRM检测 | 第39-40页 |
| 3.1.7 数据处理 | 第40-41页 |
| 3.2 结果与分析 | 第41-47页 |
| 3.2.1 目标基因和蛋白鉴定 | 第41页 |
| 3.2.2 免疫相关基因和蛋白的表达变化 | 第41-46页 |
| 3.2.3 共生相关基因和蛋白的表达变化 | 第46页 |
| 3.2.4 基因表达和蛋白丰度的相关性分析 | 第46-47页 |
| 3.3 讨论 | 第47-50页 |
| 第四章 绿僵菌粘附素Mad1基因克隆与表达 | 第50-63页 |
| 4.1 材料与方法 | 第50-58页 |
| 4.1.1 供试材料 | 第50页 |
| 4.1.2 主要培养基及缓冲液 | 第50-51页 |
| 4.1.3 菌丝培养及总RNA提取 | 第51-52页 |
| 4.1.4 粘附素Mad1基因的克隆 | 第52-54页 |
| 4.1.5 目的基因与表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 4.1.6 酵母电转感受态的制作 | 第55页 |
| 4.1.7 重组质粒线性化及电转 | 第55页 |
| 4.1.8 PCR筛选阳性克隆 | 第55-56页 |
| 4.1.9 重组酵母的诱导表达 | 第56页 |
| 4.1.10 发酵液上清纯化 | 第56-57页 |
| 4.1.11 菌体破碎与纯化 | 第57页 |
| 4.1.12 蛋白浓缩及功能验证 | 第57页 |
| 4.1.13 数据处理 | 第57-58页 |
| 4.2 结果与分析 | 第58-62页 |
| 4.2.1 绿僵菌Mad1基因的克隆 | 第58页 |
| 4.2.2 重组毕赤酵母GS115的验证 | 第58-59页 |
| 4.2.3 目的蛋白验证 | 第59-61页 |
| 4.2.4 功能验证 | 第61-62页 |
| 4.3 讨论 | 第62-63页 |
| 第五章 全文结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简历 | 第72页 |
