中文摘要 | 第7-10页 |
英文摘要 | 第10-13页 |
前言 | 第14-20页 |
材料和方法 | 第20-36页 |
1.实验材料 | 第20-25页 |
1.1 细胞系及培养条件 | 第20页 |
1.2 主要试剂及来源 | 第20-24页 |
1.3 常用试剂的配制 | 第24-25页 |
2.实验方法 | 第25-35页 |
2.1 细胞培养和冻存 | 第25-26页 |
2.2 质粒构建 | 第26-29页 |
2.3 质粒转染细胞 | 第29页 |
2.4 SiRNA转染细胞 | 第29-30页 |
2.5 免疫印迹检测 | 第30-31页 |
2.6 免疫沉淀反应 | 第31-32页 |
2.7 细胞免疫荧光染色 | 第32页 |
2.8 泛素分析 | 第32-33页 |
2.9 肿瘤坏死因子α(TNFα)刺激细胞 | 第33页 |
2.10 总RNA提取 | 第33页 |
2.11 逆转录合成cDNA | 第33-34页 |
2.12 半定量RT-PCR检测Usp48,Traf2,Traf6和E-cadherin mRNA水平 | 第34页 |
2.13 电子细胞基质阻抗测定(ECIS)测量跨上皮电阻抗值 | 第34-35页 |
3.数据的获取及分析 | 第35-36页 |
3.1 数据的获取 | 第35页 |
3.2 统计学分析 | 第35-36页 |
结果 | 第36-58页 |
1.USP48调节TRAF2蛋白稳定性 | 第36-38页 |
2.USP48调控TRAF2蛋白的泛素化 | 第38-40页 |
3.GSK3β调节TNFα介导的USP48磷酸化 | 第40-44页 |
4.GSK3β介导的USP48磷酸化有助于TRAF2蛋白稳定 | 第44-46页 |
5.GSK3β介导USP48磷酸化修饰能够增加USP48去泛素化酶活性 | 第46-48页 |
6.敲降USP48能够减弱TRAF2介导的JNK1激活并且能够增加E-钙黏蛋白表达 | 第48-55页 |
7.USP48和JNK活性调节上皮屏障功能 | 第55-58页 |
讨论 | 第58-63页 |
结论 | 第63-64页 |
参考文献 | 第64-72页 |
综述 | 第72-89页 |
参考文献 | 第82-89页 |
攻读学位期间发表文章情况 | 第89-91页 |
致谢 | 第91-92页 |